Alisertib (MLN8237)

Katalog-Nr.S1133 Charge:S113311

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Technische Daten

Formel

C27H20ClFN4O4
Molekulargewicht 518.92 CAS-Nr. 1028486-01-2
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 35 mg/mL (67.44 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Alisertib (MLN8237) ist ein selektiver Aurora A-Inhibitor mit einer IC50 von 1,2 nM in einem zellfreien Assay und weist eine >200-fach höhere Selektivität für Aurora A als für Aurora B auf. Diese Verbindung induziert Zellzyklusarrest, Apoptose und Autophagy. Phase 3.
Ziele
Aurora A
(Cell-free assay)
1.2 nM
In vitro

Alisertib (MLN8237) zeigt eine >200-fach höhere Selektivität für Aurora A als die strukturell verwandte Aurora B mit einer IC50 von 396,5 nM und weist keine signifikante Aktivität gegen 205 andere Kinasen auf. Die Behandlung mit dieser Verbindung (0,5 μM) hemmt die Phosphorylierung von Aurora A in MM1.S- und OPM1-Zellen, ohne die Aurora B-vermittelte Histon-H3-Phosphorylierung zu beeinflussen. Es hemmt signifikant die Zellproliferation in multiplen Myelom- (MM) Zelllinien mit IC50-Werten von 0,003-1,71 μM und zeigt eine potentere Anti-Proliferationsaktivität gegen primäre MM-Zellen und MM-Zelllinien in Anwesenheit von BM-Stroma-Zellen sowie IL-6 und IGF-1 als gegen MM-Zellen allein. Bei 0,5 μM induziert es eine 2- bis 6-fache Zunahme der G2/M-Phase in primären MM-Zellen und Zelllinien sowie signifikante Apoptosis und Seneszenz, die die Hochregulierung von p53, p21 und p27 sowie die Spaltung von PARP, Caspase 3 und Caspase 9 umfassen. Darüber hinaus zeigt es einen starken synergistischen Anti-MM-Effekt mit Hexadecadrol sowie einen additiven Effekt mit Doxorubicin und LDP-341. Diese Verbindung (0,5 μM) verursacht die Hemmung der Koloniebildung von FLO-1-, OE19- und OE33-Ösophagus-Adenokarzinom-Zelllinien und induziert einen signifikanten Anstieg des Anteils polyploider Zellen und anschließend einen Anstieg des Anteils von Zellen in der Sub-G1-Phase, der in Kombination mit NSC 119875 (2,5 μM) weiter verstärkt werden kann, wobei eine höhere Induktion von TAp73β, PUMA, NOXA, gespaltener Caspase-3 und gespaltener PARP im Vergleich zu einer Einzelwirkstoffbehandlung auftritt.

In vivo

Alisertib (MLN8237) reduziert signifikant die Tumorlast mit einer Tumorwachstumshemmung (TGI) von 42% und 80% bei 15 mg/kg bzw. 30 mg/kg und verlängert das Überleben der Mäuse im Vergleich zur Kontrolle.

Merkmale Erster oral verfügbarer Inhibitor von Aurora A.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Aurora A radioaktiver Flashplate-Enzymtest

    Ein radioaktiver Flashplate-Enzymtest für Aurora A wird durchgeführt, um die Art und den Grad der durch Alisertib (MLN8237) in vitro vermittelten Hemmung zu bestimmen. Rekombinante Aurora A wird in Sf9-Zellen exprimiert und mittels GST-Affinitätschromatographie gereinigt. Das Peptidsubstrat für Aurora A ist mit Biotin (Biotin-GLRRASLG) konjugiert. Aurora A Kinase (5 nM) wird in 50 mM Hepes (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0,05% Tween 20, 2 μM Peptidsubstrat, 3,3 μCi/mL [γ-33P]ATP bei 2 μM und steigenden Konzentrationen dieser Verbindung unter Verwendung von Image FlashPlates getestet.
Zell-Assay:

[2]
  • Zelllinien

    MM1.S, MM.1R, LR5, RPMI 8226, DOX40, OPM1, OPM2, INA6, and U266

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Inkubationszeit

    24, 48, and 72 hours

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Alisertib (MLN8237) for 24, 48, and 72 hours. Cell viability is measured using MTT assay, and cell proliferation is measured using 3[H]-thymidine incorporation. For cell cycle analysis, cells are permeabilized by 70% ethanol at -20 °C, and incubated with 50 μg/mL PI and 20 units/mL RNase-A. DNA content is analyzed by flow cytometry using BDFACS-Canto II and FlowJo software. For the detection of apoptosis and senescence, cells are stained with Resorcinolphthalein isothiocyanate-annexin V and PI. Apoptotic cells are determined by flow cytometric analysis using BDFACS-Canto II and FlowJo software.
Tierstudie:

[2]
  • Tiermodelle

    Severe combined immune-deficient (SCID) mice inoculated subcutaneously with MM1.S cells

  • Dosierungen

    ~30 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Orally

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22016509/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20382844/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22302096/

Kundenproduktvalidierung

<p>Alisertib inhibits AURKA and AURKB in a concentration-dependent manner. (a) Alisertib induces G 2 /M delay or genome reduplication. HeLa cells were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. After 24 h, the cells were harvested and analyzed with flow cytometry. The positions of 2N, 4N and 8N DNA contents are indicated. (b) Alisertib delays mitotic exit or induces slippage. HeLa cells stably expressing histone H2B-GFP were exposed to buffer or the indicated concentrations of Alisertib. Individual cells were then tracked for 24 h with time-lapse microscopy. Each horizontal bar represents one cell (n ¼ 50). Key: light gray ¼ interphase; black ¼ mitosis (from DNA condensation to anaphase or mitotic slippage); dark gray ¼ interphase after mitotic slippage; truncated bars ¼ cell death. (c) Different concentrations of Alisertib are involved in delaying mitotic exit and inducing slippage. Live-cell imaging of cells treated with Alisertib was described in panel (b). The duration of mitosis (mean±90% confidence interval) and the percentage of cells that underwent mitotic slippage during the imaging period was quantified. (d) Alisertib promotes apoptosis in a concentration-dependent manner. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The cells were then harvested and analyzed with flow cytometry. (e) Concentration-dependent cytotoxicity of Alisertib. HeLa cells were cultured in the presence of the indicated concentrations of Alisertib for 48 h. The number of live and dead cells was analyzed with trypan blue exclusion assay. (f) Concentration-dependent suppression of long-term survival by Alisertib. HeLa cells were seeded on 60-mm culture plates and grown in the presence of 250 n M or 1 m M of Alisertib. After 24 h, the cells were washed gently and propagated in normal medium for another 10–12 days. Colonies were fixed and stained with crystal violet solution (examples of the plates are shown). Average±s.d. from three independent experiments. (g) Both AURKA and AURKB are inhibited by Alisertib.Mitotic HeLa cells were obtained by exposure to nocodazole for 16 h followed by mechanical shake off. The cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 2 h. Lysates were then prepared and activated phospho-AURKAThr288 and AURKBThr232were detected with immunoblotting. The asterisk indicates the position of an AURKB-like protein (the same throughout this study). Uniform loading was confirmed by immunoblotting for actin. In this assay, nocodazole and MG132 (a proteasome inhibitor) were added to prevent the cells from exiting mitosis. Accordingly, the total AURKA and AURKB levels remained constant throughout the experiment. (h) Alisertib prevents activation of AURKA and AURKB. HeLa cells were incubated with the indicated concentrations of Alisertib for 8 h. Nocodazole was then added for another 6 h to trap cells that entered mitosis. Lysates were prepared and analyzed with immunoblotting. Actin analysis was included to assess loading and transfer.</p>

Daten von [ Oncogene , 2014 , 33, 3550-60 ]

Tissue levels of 53BP1, a-tubulin, IkB-a and IL-6 in an Hs294T xenograft treated with MLN8237 or vehicle control were visualized by immunofluorescence co-staining with DAPI. Representative micrographs are shown from triplicate experiments.

Daten von [ EMBO Mol Med , 2013 , 5(1), 149-66 ]

Inhibition of Aurka kinase activity by MLN8237 impairs expression of pluripotency genes in CCE cells as measured by qRT-PCR. All values shown are mean ?SEM for n=3. The level of phosphorylated H3(S10) (p-H3(S10)), an Aurka phosphorylation target site, is decreased in MLN8237-treated samples.

Daten von [ Cell Stem Cell , 2012 , 11, 179-94 ]

<p>Recruitment of clathrin to the mitotic spindle is controlled by phosphorylation of TACC3 by Aurora-A kinase. Representative micrographs of HEK293 cells incubated with 0.3 μM MLN8237 for 40 min. Cells were fixed and stained as indicated.</p>

Daten von [ EMBO J , 2012 , 30, 906-19 ]

Sellecks Alisertib (MLN8237) Wurde zitiert von 380 Publikationen

Centromere protection requires strict mitotic inactivation of the Bloom syndrome helicase complex [ Nat Commun, 2025, 16(1):7832] PubMed: 40846865
Aurora A regulates the material property of spindle poles to orchestrate nuclear organization at mitotic exit [ EMBO J, 2025, 10.1038/s44318-025-00564-4] PubMed: 40940421
Targeted inhibition of Aurora kinase A promotes immune checkpoint inhibition efficacy in human papillomavirus-driven cancers [ J Immunother Cancer, 2025, 13(1)e009316] PubMed: 39773561
An Aurora kinase A-BOD1L1-PP2A B56 axis promotes chromosome segregation fidelity [ Cell Rep, 2025, 44(2):115317] PubMed: 39970043
The AURKA inhibitor alters the immune microenvironment and enhances targeting B7-H3 immunotherapy in glioblastoma [ JCI Insight, 2025, e173700] PubMed: 39928563
CDK1-mediated phosphorylation of LDHA fuels mitosis through LDHB-dependent lactate oxidation [ EMBO Rep, 2025, 10.1038/s44319-025-00573-8] PubMed: 40940446
Cellular senescence as a prognostic marker for predicting breast cancer progression in 2D and 3D organoid models [ Biomed Pharmacother, 2025, 189:118324] PubMed: 40616881
Actionable heterogeneity of hepatocellular carcinoma therapy-induced senescence [ Cancer Immunol Immunother, 2025, 74(7):207] PubMed: 40374812
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023] PubMed: 40795355
O 6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT) expression in U1242 glioblastoma cells enhances in vitro clonogenicity, tumor implantation in vivo, and sensitivity to alisertib-carboplatin combination treatment [ Front Cell Neurosci, 2025, 19:1552015] PubMed: 40336841

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