A-674563 HCl

A-674563 HCl est obtenu à partir de A-443654 en remplaçant l'indole par un fragment phényle et en obtenant une activité orale. A-674563 ralentit la prolifération des cellules tumorales avec une EC50 de 0,4 The kinase assay uses His-Akt1 and a biotinylated mouse Bad peptide as substrate. The kinase assay is carried out at room temperature for 30 minutes in 50 M. [1] A-674563 n'inhibe pas la phosphorylation d'Akt en soi, mais bloque la phosphorylation des cibles en aval d'Akt de manière dose-dépendante. Le blocage d'Akt induit par A-674563 entraîne une diminution de la phosphorylation des cibles en aval des cellules STS et une inhibition de la croissance des cellules tumorales. A-674563 induit un arrêt du cycle cellulaire en phase G2 et une apoptose dans les cellules STS. [2]

A-674563 ne montre aucune activité inhibitrice tumorale significative en monothérapie; l'efficacité de la thérapie combinée est significativement améliorée par rapport à la monothérapie. [1] Les souris traitées avec A674563 (20 mg/kg/bid, p.o.) présentent une croissance tumorale plus lente et une diminution de plus de 50% du volume tumoral à la fin de l'étude par rapport au groupe témoin. [2] A-674563 est identifié comme ayant un profil PK drastiquement amélioré avec une biodisponibilité orale de 67% chez la souris, mais est 70 fois moins actif que A-443654. [3]

• Test Kinase Akt

  Le test kinase utilise His-Akt1 et un peptide Bad de souris biotinylé comme substrat. Le test kinase est effectué à température ambiante pendant 30 minutes dans 50 M. The kinase assay uses His-Akt1 and a biotinylated mouse Bad peptide as substrate. The kinase assay is carried out at room temperature for 30 minutes in 50 L de tampon de réaction [20 mM HEPES, pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 0,1% (p/v) Triton X-100, 5 L de tampon de réaction [20 mM HEPES, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 0.1% (w/v) Triton X-100, 5 M ATP (K_m = 40 M ATP (K_m = 40 M), 5 M), 5 M peptide (K_m = 15 M peptide (K_m = 15 M), 1 mM DTT, 60 ng d'Akt1, et 0,5 M), 1 mM DTT, 60 ng of Akt1, and 0.5 Ci de [ ³³P]ATP] en présence de différentes concentrations de A-674563. Chaque réaction est arrêtée par l'ajout de 50 Ci of [ ³³P]ATP] in the presence of different concentrations of A-674563. Each reaction is stopped by adding 50 L de tampon de terminaison (0,1 M EDTA, pH 8,0 et 4 M NaCl). Les peptides Bad biotinylés sont immobilisés sur des plaques FLASH revêtues de streptavidine. Après lavage avec du PBS-Tween 20 (0,05%), le phosphopeptide ³³P capturé sur les plaques FLASH est mesuré avec un compteur γ TopCount Packard Instruments.

• Lignées cellulaires

  MiaPaCa-2 cells

• Concentrations

  0-30 μM

• Temps dincubation

  48 hours

• Méthode

  The cells on 96-well plates are gently washed with 200 μL of PBS. Alamar Blue reagent is diluted 1:10 in normal growth media. The diluted Alamar Blue reagent (100 M) is added to each well on the 96-well plates and incubated until the reaction is complete as per manufacturer's instructions. Analysis is done using an fmax Fluorescence Microplate Reader, set at the excitation wavelength of 544 nm and emission wavelength of 595 nm. Data are analyzed using SOFTmax PRO software provided by the manufacturer.

• Modèles animaux

  Fasted mice

• Dosages

  20 or 100 mg/kg

• Administration

  A-674563 is administered 30 minutes before the 1 g/kg glucose challenge.