SRT1720 HCl

De maximale activeringsratio van SRT1720 ten opzichte van de meest verwante sirtuin homologen, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) en SIRT3 (EC1.5 > 300 μM) bedraagt tot 781%. SRT1720 bindt aan het SIRT1 enzym-peptide substraatcomplex op een allosterische plaats amino-terminaal van het katalytische domein en verlaagt de Michaelis-constante voor geacetyleerde substraten. SRT1720 zou gevoede glucoseniveaus kunnen verlagen.  SRT1720 heeft geen effect op de vastenbloedglucose bij muizen die met standaardvoer zijn gevoerd, wat aantoont dat farmacologische SIRT1-activering waarschijnlijk geen hypoglykemie zal veroorzaken. SRT1720 vermindert significant de hyperinsulinemie na 4 weken, waardoor de verhoogde insulineniveaus gedeeltelijk worden genormaliseerd. Behandeling met SRT1720 verhoogt de mitochondriale capaciteit met 15% in de gastrocnemiusspier, gemeten aan de hand van citraatsynthase-activiteit. [1] Hogere concentraties van SRT1720 (15 μM) induceren een bescheiden (10-20%) afname van de levensvatbaarheid van normale cellen. SRT1720 remt ook significant de VEGF-afhankelijke MM-celmigratie. [2]

Bij DIO-muizen bootst SRT1720 verschillende van de effecten na die worden waargenomen na calorierestrictie, waaronder verbeterde insulinegevoeligheid, genormaliseerde glucose- en insulineniveaus en verhoogde mitochondriale capaciteit. Bovendien verbetert SRT1720 bij dieet-geïnduceerd obese en genetisch obese muizen de insulinegevoeligheid, verlaagt het de plasmaglucose en verhoogt het de mitochondriale capaciteit. SRT1720 is dus een veelbelovend nieuw therapeutisch middel voor de behandeling van ouderdomsziekten zoals type 2 diabetes. In overeenstemming met de verbeterde glucosetolerantie is de glucose-infusiesnelheid die nodig is om euglykemie te handhaven ongeveer 35% hoger bij met SRT1720 behandelde fa/fa-ratten, en de totale glucoseafvoer is met ongeveer 20% verhoogd. [1] SRT1720 voorkomt ook tumorgroei van multipel myeloom. 

• SIRT1 fluorescentiepolarisatietest

  In de SIRT1 FP-test wordt de SIRT1-activiteit gemonitord met behulp van een 20 aminozuurpeptide (Ac-Glu-Glu-Lys(biotin)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 or Tamra)-Glu-Glu-NH₂) afgeleid van de sequentie van p53. Het peptide is N-terminaal gekoppeld aan biotine en C-terminaal gemodificeerd met een fluorescerende tag. De reactie voor het monitoren van enzymactiviteit is een gekoppelde enzymtest waarbij de eerste reactie de deacetylatiereactie is gekatalyseerd door SIRT1 en de tweede reactie splitsing is door trypsine op het nieuw blootgestelde lysineresidu. De reactie wordt gestopt en streptavidine wordt toegevoegd om de massaverschillen tussen substraat en product te accentueren. De gevoeligheid van de FP-test maakt identificatie van SRT1720 mogelijk. De fluorescentiepolarisatiereactiecondities zijn als volgt: 0,5 μM peptidesubstraat, 150 μM βNAD⁺, 0-10 nM SIRT1, 25 mM Tris-acetaat pH 8, 137 mM Na-Ac, 2,7 mM K-Ac, 1 mM Mg-Ac, 0,05% Tween-20, 0,1% Pluronic F127, 10 mM CaCl2, 5 mM DTT, 0,025% BSA en 0,15 mM nicotinamide. De reactie wordt geïncubeerd bij 37 °C en gestopt door toevoeging van nicotinamide, en trypsine wordt toegevoegd om het gedeacetyleerde substraat te splitsen. Deze reactie wordt geïncubeerd bij 37 °C in aanwezigheid van 1 μM streptavidine. Fluorescentiepolarisatie wordt bepaald bij excitatie (650 nm) en emissie (680 nm) golflengten.

• Cellijnen

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Concentraties

  5 μM

• Incubatietijd

  2 hours

• Methode

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Dierlijke modellen

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Doseringen

  200 mg/kg

• Toediening

  Orally