In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Captisol
Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.
17.000mg/ml
(29.79mM)
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
LRRK2-IN-1 is een krachtige en selectieve LRRK2-remmer met een IC50 van respectievelijk 6 nM en 13 nM voor LRRK2 (G2019S) en LRRK2 (WT).
Doelen
LRRK2 (G2019S) (Cell-free assay)
LRRK2 (WT) (Cell-free assay)
DCLK2 (Cell-free assay)
6 nM
13 nM
45 nM
In vitro
In HEK 293-cellen die stabiel GFP-LRRK2[G2019S] tot expressie brengen, verandert LRRK2-IN-1 de cytoplasmatische lokalisatie van LRRK2. In van de mens afgeleide neuroblastoom SHSY5Y-cellen en muis Swiss 3T3-cellen induceert deze verbinding een vergelijkbare dosisafhankelijke Ser910- en Ser935-defosforylering en verlies van 14-3-3-binding aan endogeen LRRK2. In transgene C. elegans die menselijk R1441C- en G2019S-LRRK2 tot expressie brengen, herstelt het het gedragsdefect dat kenmerkend is voor dopaminerge stoornissen. In muizenfibroblasten vermindert deze chemische stof de celmotiliteit. In de cellijnen AsPC-1 en HCT116 vertoont het antiproliferatieve en pro-apoptotische eigenschappen, induceert het G1- en G2/M-celcyclusarrest en remt het de DCLK1 mRNA- en eiwitexpressie.
In Vivo
Bij wildtype mannelijke C57BL/6-muizen remt LRRK2-IN-1 (100 mg/kg, i.p.) de Ser910- en Ser935-defosforylering van LRRK2 in de nier, terwijl er geen effecten in de hersenen zijn.
Actief GST-LRRK2 (1326-2527), GST-LRRK2 [G2019S] (1326-2527), GST-LRRK2 [A2016T] (1326-2527) en GST-LRRK2 [A2016T+G2019S] (1326-2527) enzym wordt gezuiverd met glutathionsepharose uit HEK293-celysaat 36 uur na transiënte transfectie van de geschikte cDNA-constructen. Peptidekinase-assays, in duplo uitgevoerd, worden opgezet in een totaal volume van 40 µL met 0,5 µg van deze verbinding (wat bij ongeveer 10% zuiverheid een uiteindelijke concentratie van 8 nM geeft) in 50 mM Tris/HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 mM MgCl2, 20 µM Nictide, 0.1 µM [γ-32P]ATP (~500 cpm/pmol) en de aangegeven concentraties van remmer opgelost in DMSO. Na incubatie gedurende 15 min bij 30 °C worden de reacties beëindigd door 35 µL van het reactiemengsel op P81-fosfocellulosepapier te druppelen en onder te dompelen in 50 mM fosforzuur. Monsters worden uitgebreid gewassen en de incorporatie van [γ-32P]ATP in Nictide wordt gekwantificeerd door Cerenkov-telling. IC50-waarden worden berekend met GraphPad Prism met behulp van niet-lineaire regressieanalyse.
Cells are seeded into a 96-well tissue culture plate in triplicate. The cells are cultured in the presence of LRRK2-IN-1 with DMSO as a vehicle at 0, 0.31, 0.63, 1, 2, and 5, 10, and 20 μM. 48 h post treatment, 10 μL of TACS MTT Reagent (RND Systems) is added to each well and the cells are incubated at 37°C until dark crystalline precipitate became visible in the cells. 100 μL of 266 mM NH4OH in DMSO is then added to the wells and placed on a plate shaker at low speed for 1 minute. After shaking, the plate is allowed to incubate for 10 minutes protected from light and the OD550 for each well is read using a microplate reader. The results are averaged and calculated as a percentage of the DMSO (vehicle) control +/- the standard error of the mean.
Differential BET Bromodomain Inhibition by Dihydropteridinone and Pyrimidodiazepinone Kinase Inhibitors
[ J Med Chem, 2021, 10.1021/acs.jmedchem.1c01096]
VIP Induces Changes in the F-/G-Actin Ratio of Schlemm's Canal Endothelium via LRRK2 Transcriptional Regulation
[ Invest Ophthalmol Vis Sci, 2020, 61(6):45]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
