PHA-793887 CDK inhibitor

Multi-CDK inhibitor.

PHA-793887 hat eine geringe Aktivität gegen CDK1, CDK4, CDK9 und GSK3β mit einer IC50 von 60 nM, 62 nM, 138 nM bzw. 79 nM. Diese Verbindung hemmt die Zellproliferation vieler Tumorzelllinien, einschließlich A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7 und BX-PC3, mit einer IC50 von 88 nM–3,4 μM. Es (1 μM) zeigt eine Abnahme der S-Phase, eine anschließende Zunahme der G1-Phase und eine leichte Akkumulation der G2/M-Phase in A2780-Zellen. Diese Chemikalie (3 μM) erhöht signifikant die G2/M-Phase und reduziert die DNA-Synthese. [1] Es ist zytotoxisch für leukämische Zelllinien, einschließlich K562, KU812, KCL22 und TOM1, mit einer IC50 von 0,3–7 μM, aber es ist nicht zytotoxisch für normale unstimulierte mononukleäre Zellen des peripheren Blutes oder CD34+-hämatopoetische Stammzellen. In Kolonietests zeigt diese Verbindung eine sehr hohe Aktivität gegen Leukämiezelllinien mit einer IC50 von weniger als 0,1 μM. Sie induziert Zellzyklusarrest, hemmt die Rb- und Nukleophosmin-Phosphorylierung und moduliert die Cyclin E- und cdc6-Expression bei 0,2–1 μM und induziert Apoptose bei 5 μM. [2]

CDK-Kinase-Assay

Die biochemische Aktivität von Verbindungen wird durch Inkubation mit spezifischen Enzymen und Substraten bestimmt, gefolgt von der Quantifizierung des phosphorylierten Produkts. PHA-793887 (1,5 nM–10 μM) wird für 30–90 Minuten bei Raumtemperatur in Gegenwart von ATP/³³P-γ-ATP-Mix, Substrat und dem spezifischen Enzym (0,7–100 nM) in einem Endvolumen von 30 μL Kinasepuffer unter Verwendung von 96 U Bodenplatten inkubiert. Nach der Inkubation wird die Reaktion gestoppt und das phosphorylierte Substrat wird von nicht-inkorporiertem radioaktiven ATP unter Verwendung von SPA-Beads, Dowex-Harz oder Multiscreen-Phosphozellulosefiltern wie folgt getrennt: (1) Für SPA-Assays. Die Reaktion wird durch Zugabe von 100 μL PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 μM ATP, enthaltend 1 mg Streptavidin-beschichtete SPA-Beads, gestoppt. Nach 20 Minuten Inkubation zur Substratabscheidung werden 100 μL des Reaktionsgemisches in Optiplate-96-Well-Platten, enthaltend 100 μL 5 M CsCl, überführt, 4 Stunden stehen gelassen, um eine Schichtung der Beads an der Oberseite der Platte zu ermöglichen, und unter Verwendung von TopCount zur Messung des in das Substrat eingebauten Phosphats gezählt. (2) Für Dowex-Harz-Assays. Eine Menge von 150 μL Harz/Formiat, pH 3,00, wird hinzugefügt, um die Reaktion zu stoppen und nicht umgesetztes ³³P-γ-ATP abzufangen, wodurch es vom phosphorylierten Substrat in Lösung getrennt wird. Nach 60 Minuten Ruhe werden 50 μL des Überstands in Optiplate-96-Well-Platten überführt. Nach Zugabe von 150 μL Microscint 40 wird die Radioaktivität im TopCount gezählt. (3) Für Multiscreen-Assays. Die Reaktion wird durch Zugabe von 10 μL EDTA (150 mM) gestoppt. Eine Menge von 100 μL wird auf eine MultiScreen-Platte übertragen, um die Substratbindung an den Phosphozellulosefilter zu ermöglichen. Die Platten werden dann dreimal mit 100 μL H₂PO₄ (75 mM), gefiltert durch ein MultiScreen-Filtrationssystem, gewaschen und getrocknet. Nach Zugabe von 100 μL Microscint 0 wird die Radioaktivität im TopCount gezählt. Die IC50-Werte werden durch nichtlineare Regressionsanalyse erhalten.

PHA-793887 (10–30 mg/kg) zeigt eine gute Wirksamkeit in den Xenograft-Modellen für menschliches Ovarialkarzinom A2780, Kolonkarzinom HCT-116 und Pankreaskarzinom BX-PC3. [1] Diese Verbindung (20 mg/kg) ist wirksam in Xenograft-Modellen von K562- und HL60-Zellen, einem primären disseminierten Leukämiemodell und einem hochbelasteten disseminierten ALL-2-Modell, das von einem Patienten mit rezidivierender Philadelphia-positiver akuter lymphatischer Leukämie stammt. [2]