PHA-793887 CDK Inhibitor

Multi-CDK inhibitor.

PHA-793887 has low activity against CDK1, CDK4, CDK9 and GSK3β with IC50 of 60 nM, 62 nM, 138 nM and 79 nM, respectively. This compound inhibits cell proliferation of many tumor cell lines, including A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7, and BX-PC3, with IC50 of 88 nM–3.4 μM. It (1 μM) shows a decrease in the S phase, a subsequent increase of the G1 phase and a slight accumulation of G2/M phase in A2780 cells. This chemical (3 μM) significantly increases G2/M phase and reduces DNA synthsis. [1] It is cytotoxic for leukemic cell lines, including K562, KU812, KCL22, and TOM1, with IC50 of 0.3–7 μM, but it is not cytotoxic for normal unstimulated peripheral blood mononuclear cells or CD34+ hematopoietic stem cells. In colony assays, this compound shows very high activity against leukemia cell lines with IC50 less than 0.1 μM. It induces cell-cycle arrest, inhibits Rb and nucleophosmin phosphorylation, and modulates cyclin E and cdc6 expression at 0.2−1 μM and induces apoptosis at 5 μM. [2]

CDK-Kinase-Assay

Die biochemische Aktivität von Verbindungen wird durch Inkubation mit spezifischen Enzymen und Substraten bestimmt, gefolgt von der Quantifizierung des phosphorylierten Produkts. PHA-793887 (1,5 nM–10 μM) wird für 30–90 Minuten bei Raumtemperatur in Gegenwart von ATP/³³P-γ-ATP-Mix, Substrat und dem spezifischen Enzym (0,7–100 nM) in einem Endvolumen von 30 μL Kinasepuffer unter Verwendung von 96 U Bodenplatten inkubiert. Nach der Inkubation wird die Reaktion gestoppt und das phosphorylierte Substrat wird von nicht-inkorporiertem radioaktiven ATP unter Verwendung von SPA-Beads, Dowex-Harz oder Multiscreen-Phosphozellulosefiltern wie folgt getrennt: (1) Für SPA-Assays. Die Reaktion wird durch Zugabe von 100 μL PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 μM ATP, enthaltend 1 mg Streptavidin-beschichtete SPA-Beads, gestoppt. Nach 20 Minuten Inkubation zur Substratabscheidung werden 100 μL des Reaktionsgemisches in Optiplate-96-Well-Platten, enthaltend 100 μL 5 M CsCl, überführt, 4 Stunden stehen gelassen, um eine Schichtung der Beads an der Oberseite der Platte zu ermöglichen, und unter Verwendung von TopCount zur Messung des in das Substrat eingebauten Phosphats gezählt. (2) Für Dowex-Harz-Assays. Eine Menge von 150 μL Harz/Formiat, pH 3,00, wird hinzugefügt, um die Reaktion zu stoppen und nicht umgesetztes ³³P-γ-ATP abzufangen, wodurch es vom phosphorylierten Substrat in Lösung getrennt wird. Nach 60 Minuten Ruhe werden 50 μL des Überstands in Optiplate-96-Well-Platten überführt. Nach Zugabe von 150 μL Microscint 40 wird die Radioaktivität im TopCount gezählt. (3) Für Multiscreen-Assays. Die Reaktion wird durch Zugabe von 10 μL EDTA (150 mM) gestoppt. Eine Menge von 100 μL wird auf eine MultiScreen-Platte übertragen, um die Substratbindung an den Phosphozellulosefilter zu ermöglichen. Die Platten werden dann dreimal mit 100 μL H₂PO₄ (75 mM), gefiltert durch ein MultiScreen-Filtrationssystem, gewaschen und getrocknet. Nach Zugabe von 100 μL Microscint 0 wird die Radioaktivität im TopCount gezählt. Die IC50-Werte werden durch nichtlineare Regressionsanalyse erhalten.

PHA-793887 (10–30 mg/kg) shows good efficacy in the human ovarian A2780, colon HCT-116, and pancreatic BX-PC3 carcinoma xenograft models. [1] This compound (20 mg/kg) is effective in xenograft models of K562 and HL60 cells, primary leukemic disseminated model, and a high-burden disseminated ALL-2 model derived from a relapsed Philadelphia-positive acute lymphoid leukemia patient. [2]