Home Immunology & Inflammation ROS Aktivator Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

nur für Forschungszwecke

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS-Aktivator

Kat.-Nr.S7873

Dinatriumsalz von (R)-2-Hydroxyglutarat (D-α-Hydroxyglutarsäure-Dinatriumsalz) ist ein kompetitiver Inhibitor von α-Ketoglutarat-abhängigen Dioxygenasen mit einem Ki von 10,87 ± 1,85 mM.
Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS Aktivator Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 192.08

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.74%
99.74

Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 192.08 Formel

C5H6Na2O5

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 103404-90-6 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme D-α-Hydroxyglutaric acid disodium Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase
In vitro
In U-87MG-Zellen wirkt (R)-2-Hydroxyglutarat als schwacher Antagonist von α-KG, um α-KG-abhängige Histon-Demethylasen zu hemmen und die Dimethylierung sowohl an H3K9 als auch an H3K79 zu erhöhen. Außerdem hemmt (R)-2-Hydroxyglutarat die ATP-Synthase und die mTOR-Signalübertragung und verursacht somit Wachstumsstillstand und die Abtötung von Tumorzellen.
Kinase-Assay
Enzymatische Assays
Zur Bestimmung der humanen JHDM1A/KDM2A-Demethylaseaktivität gegenüber H3K36me2 wird His-markiertes JHDM1A zuerst durch Transformation von pET28a-JHDM1A in Escherichia coli BL21 erhalten, und die Proteinexpression wird durch Zugabe von 1 mM IPTG bei 30 °C induziert, wenn die Zelldichte 0,5 OD600-Einheiten erreicht. Die Zellen werden durch Sonikation lysiert und Ni-NTA-Agarose wird zur Reinigung der His-JHDM1A-Fusionsproteine verwendet. Der Histon-Demethylase-Assay wird durchgeführt, indem 2 μg Oligonukleosomen, 4 μg gereinigtes His-JHDM1A und/oder 10–50 mM L- oder D-2-HG in Histon-Demethylierungs-Puffer [50 mM HEPES (pH 8,0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0,1–0,5 mM α-KG, 2 mM Ascorbat] bei 37 °C für 2–3 Stunden inkubiert werden, und die Reaktionen werden durch Zugabe von SDS-Ladepuffer gestoppt und anschließend mittels Western Blotting unter Verwendung eines Anti-H3K36me2-Antikörpers analysiert. Zur Messung der CeKDM7A-Demethylaseaktivität gegenüber H3K9me2 und H3K27me2 werden zwei synthetische dimethylierte Peptide H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] und H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS] als Substrate verwendet. Demethylase-Assays werden in Anwesenheit von 10 μg Enzym, 1 μg Peptid in 20 μl Puffer 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF für 3 Stunden durchgeführt. Das Demethylierungs-Reaktionsgemisch wird durch Passage durch eine C18 ZipTip entsalzt. Um die hemmende Wirkung von 2-HG zu untersuchen, werden verschiedene Konzentrationen von 2-HG kurz vor Zugabe anderer Reaktionsgemische mit KDM7A inkubiert. Die Proben werden mit einem MALDI-TOF/TOF-Massenspektrometer analysiert.
Literatur