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JNK-IN-8 JNK Inhibitor

Kat.-Nr.: S4901

JNK-IN-8 (JNK Inhibitor XVI) ist der erste irreversible JNK-Inhibitor für JNK1, JNK2 und JNK3 mit einer IC50 von 4,7 nM, 18,7 nM und 1 nM, einer >10-fachen Selektivität gegenüber MNK2, Fms und keiner Hemmung von c-Kit, Met, PDGFRβ in der A375-Zelllinie.
JNK-IN-8 JNK Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 507.59

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.16%
99.16

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
human HeLa cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human HeLa cells after 1 hr incubation, IC50=0.486 μM 25415535
human A375 cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human A375 cells after 1 hr incubation, IC50=0.338 μM 25415535
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 507.59 Formel

C29H29N7O2

 Lagerung (Ab dem Eingangsdatum)
CAS-Nr. 1410880-22-6 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme JNK Inhibitor XVI Smiles CC1=C(C=CC(=C1)NC(=O)C2=CC(=CC=C2)NC(=O)C=CCN(C)C)NC3=NC=CC(=N3)C4=CN=CC=C4

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 100 mg/mL (197.0 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewichtsrechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie die untenstehenden Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier zur Berücksichtigung von Verlusten während des Experiments)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, keine Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn es im Abschnitt "Löslichkeit" keine In-vivo-Formulierung gibt.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammlösung: mg Wirkstoff vorgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammlösung mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügenμL PEG300, mischen und klären, dann hinzufügenμL Tween 80, mischen und klären, dann hinzufügen μL ddH2O, mischen und klären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammlösung, dann hinzufügen μL Maisöl, mischen und klären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, das/die Lösungsmittel der Reihe nach hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die bei der vorherigen Zugabe erhaltene Lösung eine klare Lösung ist, bevor Sie mit der Zugabe des nächsten Lösungsmittels fortfahren. Physikalische Methoden wie Vortex, Ultraschall oder ein heißes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösens verwendet werden.

Wirkmechanismus (Mechanism of Action)

Merkmale
JNK-IN-8 and JNK-IN-7 are structurally very similar, but whereas the former is a specific covalent inhibitor of JNKs.
Targets/IC50/Ki
JNK3
(A375 cells)
1 nM
JNK1
(A375 cells)
4.7 nM
JNK2
(A375 cells)
18.7 nM
Kit (V559D,T670I)
(A375 cells)
56 nM
Kit (V559D)
(A375 cells)
92 nM
In vitro

JNK-IN-8 inhibits c-Jun phosphorylation in HeLa and A375 cells with EC50 of 486 nM and 338 nM, respectively. This compound shows a dramatic improvement in selectivity and eliminated binding to IRAK1, PIK3C3, PIP4K2C, and PIP5K3. It requires Cys116 for JNK2 inhibition.

This chemical (10 mM) suppresses the IL-1β-stimulated phosphorylation of c-Jun in IL-1R cells, an established substrate of the JNKs. It covalently attaches to the JNK isoforms caused a small retardation in the electrophoretic mobility of the JNK isoforms.

It is discovered to inhibit JNK kinase by broad-based kinase selectivity profiling of a library of acrylamide kinase inhibitors based on the structure of using the KinomeScan approach. This compound possesses distinct regiochemistry of the 1,4-dianiline and 1,3-aminobenzoic acid substructures. It adopts an L-shaped type I binding conformation to access Cys 154 located toward the lip of the ATP-binding site.

Kinase-Assay
Bindungskinetik-Assay
Bindungskinetik-Assay A375-Zellen werden mit 1 μM JNK-IN-8 für die angegebenen Zeiträume vorbehandelt. Das Medium entfernen und dreimal mit PBS waschen. Das Zellpellet mit 1 ml Lysepuffer (1% NP-40, 1% CHAPS, 25 mM Tris, 150 mM NaCl, Phosphatase Inhibitor Cocktail und Protease Inhibitor Cocktail) resuspendieren. 30 min bei 4℃ von Ende zu Ende rotieren. Lysate werden durch Zentrifugation bei 1,4×104 rpm für 15 min im Eppendorf geklärt. Die geklärten Lysate werden mittels 10DG-Säulen in Kinase-Puffer (0,1% NP-40, 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, Phosphatase Inhibitor Cocktail, Protease Inhibitor Cocktail) gelfiltert. Die Gesamtproteinkonzentration des gelfilterten Lysats sollte etwa 5–15 mg/ml betragen. Zelllysat wird mit der Sonde von ActivX bei 5 μM für 1 Stunde markiert. Proben werden mit DTT reduziert, und Cysteine werden mit Iodoacetamid blockiert und gelfiltert, um überschüssige Reagenzien zu entfernen und den Puffer auszutauschen. 1 Volumen 2× Binding Buffer (2% Triton-100, 1% NP-40, 2 mM EDTA, 2× PBS) und 50 μL Streptavidin-Bead-Slurry hinzufügen und 2 Stunden von Ende zu Ende rotieren, bei 7.000 rpm für 2 min zentrifugieren. Dreimal mit 1× Binding Buffer und dreimal mit PBS waschen. 30 μL 1× Probenpuffer zu den Beads geben; Proben 10 min bei 95℃ erhitzen. Proben auf einem SDS-PAGE-Gel bei 110V laufen lassen. Nach dem Transfer wird die Membran mit JNK-Antikörper immungeblottet.
In vivo

JNK-IN-8 is a potent JNK inhibitor that specially targets JNK activation. It has anti-fungal activity.
Literatur
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28112734/

Anwendungen (Applications)

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot c-Jun / p-c-Jun / ATF2 / p-ATF2 / Elk-1 / pElk-1 Notch1 / c-Myc / Cyclin D1 / p21
S4901-WB1
27941886
Growth inhibition assay Cell viability
S4901-viability1
25847947