740 Y-P (PDGFR 740Y-P)

Das PDGFR 740Y-P Peptid stimuliert eine mitogene Reaktion in Muskelzellen. Die Fähigkeit des 740Y-P Peptids, die Mitogenese zu stimulieren, ist hochspezifisch und keine allgemeine Eigenschaft eines zellgängigen SH2-Domänen-bindenden Peptids[2].

740Y-P ist so wirksam wie ein Wachstumsfaktor (FGF2) bei der Förderung des Überlebens von neuronalen Zellen über die etablierte PI 3-Kinase-Akt-Überlebenskaskade. Die Stimulation des Überlebens neuronaler Zellen durch das PDGFR740Y-P Peptid ist dosisabhängig und erfordert kein Insulin[1].

740 Y-P senkt den Grad der ROS-Spiegel in mit Aβ(25-32) behandelten Hippocampusgeweben und erhöht das Ausmaß der AKT- und PI3K-Phosphorylierung im Rattenmodell der Alzheimer-Krankheit.

• Zelllinien

  NIH 3T3 cells

• Konzentrationen

  50 μg/ml

• Inkubationszeit

  2 h

• Methode

  NIH 3T3 cells (2×10⁶) are incubated in suspension at 37°C in Ca2+ and Mn2+ free HBSS, 10% FCS containing either 50 μg/ml of 740Y-P peptide or an equal volume of PBS as a control. After 2h cells are centrifuged, washed and trypsinised to degrade non-internalised peptide. Cells are then resuspended in lysis buffer (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 10% Glycerol, 2% NP40, 0.25% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM Vanadate, Protease inhibitors "complete" cocktail from Boehringer-Mannheim) for 1 h at 4°C. Lysates are clarified by centrifugation at 1.4×10⁴g for 5 min and the supernatants are incubated for 1h with streptavidin-agarose beads. Beads are subsequently washed three times in lysis buffer and finally boiled in SDS sample buffer and resolved by SDS-PAGE on a 12% gel, transferred to nitrocellulose and immunoblotted with the p85 monoclonal antibody.