AEE788 (NVP-AEE788)

Katalog-Nr.S1486 Charge:S148601

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Technische Daten

Formel

C27H32N6
Molekulargewicht 440.58 CAS-Nr. 497839-62-0
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 88 mg/mL (199.73 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung AEE788 (NVP-AEE788) ist ein potenter Inhibitor von EGFR und HER2/ErbB2 mit IC50 von 2 nM bzw. 6 nM. Es ist weniger potent gegen VEGFR2/KDR, c-Abl, c-Src und Flt-1 und hemmt Ins-R, IGF-1R, PKCα oder CDK1 nicht. Diese Verbindung hat Phase 1/2 der klinischen Studien erreicht.
Ziele
EGFR
(Cell-free assay)		 HER2/ErbB2
(Cell-free assay)		 c-Abl
(Cell-free assay)		 FLT1
(Cell-free assay)		 c-Fms
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
2 nM 6 nM 52 nM 59 nM 60 nM
In vitro AEE788 (NVP-AEE788) hemmt auch KDR, c-abl, c-Src und Flt-1 mit einer IC50 von 50-80 nM. Es ist nicht empfindlich gegenüber ErbB-4, PDGFR-β, Flt-3, Flt-4, RET und c-Kit und hat keine hemmende Wirkung auf Ins-R, IGF-1R, PKC-α und PKA. Diese Verbindung hemmt potent die EGFR-Phosphorylierung in A431-Zellen mit einer IC50 von 11 nM. Es hemmt auch die Phosphorylierung von KDR in CHO-Zellen und erbB2 in BT-474-Zellen, ohne Auswirkungen auf die PDGF-induzierte Phosphorylierung in A31-Zellen. Es hemmt die Proliferation von NCI-H596-, MK-, BT-474- und SK-BR-3-Zellen mit einer IC50 von 78, 56, 49 bzw. 381 nM. Darüber hinaus besitzt es die zusätzliche Eigenschaft, die durch EGFR-Mutanten, einschließlich 32D/EGFR und 32D/EGFRvIII, verursachte Zellproliferation zu hemmen. Es hemmt weiterhin sowohl die EGF- als auch die VEGF-induzierte HUVEC-Proliferation mit einer IC50 von 43 bzw. 155 nM. Es hemmt die Phosphorylierung von EGFR, VEGFR2, Akt und MAPK in humanen kutanen SCC-Zelllinien (Colo16-, HaCaT-, SRB1- und SRB12-Zellen), was zu Wachstumshemmung und Apoptose-Induktion führt. Es hemmt die Phosphorylierung von EGFR und Akt in HT29-Zellen bei 0,2 bis 1,0 μM. Es hemmt die Zellproliferation und verhindert die EGF- und Neuregulin-induzierte HER1-, HER2- und HER3-Aktivierung in Medulloblastom-Zelllinien. Es zeigt wachstumsunterdrückende Aktivitäten in chemosensiblen und chemoresistenten Medulloblastom-Zellen.
In vivo AEE788 (NVP-AEE788) bewirkt eine dosisabhängige Hemmung des Tumorwachstums in NCI-H596- oder DU145-Xenograft-Modellen, mit nur geringfügigen Veränderungen des Körpergewichts. Es induziert eine Tumorregression um 57 % bei 50 mg/kg im NeuT/erbB2 GeMag-Modell und hemmt potent die EGF-induzierte EGFR-Phosphorylierung in A431-Tumoren und die erbB2-Phosphorylierung in GeMag-Tumoren. Diese Verbindung hemmte dosisabhängig die durch VEGF induzierte Angiogenese und hemmt nicht die durch bFGF induzierte Angiogenese. Es unterdrückt das Wachstum des Tumorvolumens um 54 % in Colo16-Xenografts bei 50 mg/kg, was auf die Hemmung der Phosphorylierung von EGFR, VEGFR, Akt und MAPK zurückzuführen ist. Bei 50 mg/kg hemmt es auch das Wachstum von Tumoren im Blinddarm und Peritoneum (>50 %) und reduziert die Inzidenz von Lymphknotenmetastasen auf 70 % in HT29-Zellen, die in den Blinddarm von Nacktmäusen implantiert wurden, ohne Verlust des Körpergewichts und grobe Anzeichen von Neovaskularisation. Es senkt signifikant die Expressionsniveaus von pEGFR und pVEGFR in HT29-Blinddarmtumoren und verändert nicht die von EGF, VEGF, EGFR oder VEGFR. In Kombination mit CPT-11 führt es zu signifikant kleineren Tumoren und einer vollständigen Hemmung der Lymphknotenmetastasierung. Diese Verbindung hemmt das Wachstum von Daoy-, DaoyPt- und DaoyHER2-Xenografts um 51 %, 45 % bzw. 72 %. Es könnte die LBH589-vermittelte Produktion reaktiver Sauerstoffspezies in K562-Tumorzellen fördern, was wiederum die Apoptose erhöht.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Protein Kinase Assays

    Die In-vitro-Kinase-Assays für AEE788 (NVP-AEE788) werden in 96-Well-Platten (30 μL) bei Raumtemperatur für 15–45 min unter Verwendung der rekombinanten Glutathion-S-Transferase-fusionierten Kinasedomänen (4-100 ng, je nach spezifischer Aktivität) durchgeführt. [γ33P]ATP wird als Phosphatdonor und PolyGluTyr-(4:1)-Peptid als Akzeptor verwendet. Mit Ausnahme der Protein Kinase C-α, Cyclin-dependent Kinase 1/cycB und Protein Kinase A werden Protaminsulfat (200 μg/mL), Histon H1 (100 μg/mL) und das Heptapeptid Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly (bekannt als Kemptid Bachem) jeweils als Peptidsubstrate verwendet. Die Assays werden für jede Kinase unter Verwendung der folgenden ATP-Konzentrationen optimiert: 1,0 μM (c-Kit, c-Met, c-Fms, c-Raf-1 und RET), 2,0 μM (EGFR, erbB2, ErbB3 und ErbB4), 5,0 μM (c-abl), 8,0 μM (Flt-1, Flt-3, Flt-4, Flk, KDR, FGFR-1 und Tek), 10,0 μM (PDGFR-β, Protein Kinase C-α und Cyclin-dependent Kinase 1) und 20,0 μM (c-Src und Protein Kinase A). Die Reaktion wird durch Zugabe von 20 μL 125 mM EDTA beendet. Dreißig μL (c-abl, c-Src, Insulin-like Growth Factor-1R, RET-Men2A und RET-Men2B) oder 40 μL (alle anderen Kinasen) des Reaktionsgemisches werden auf eine Immobilon-Polyvinylidenfluoridmembran übertragen, die mit 0,5 % H3PO4 vorgetränkt und auf ein Vakuum-Manifold montiert ist. Anschließend wird Vakuum angelegt und jede Vertiefung mit 200 μL 0,5 % H3PO4 gespült. Die Membranen werden entfernt und viermal mit 1,0 % H3PO4 und einmal mit Ethanol gewaschen. Getrocknete Membranen werden nach dem Einsetzen in einen Packard TopCount 96-Well-Rahmen und der Zugabe von 10 μL/Well Microscint gezählt. IC50-Werte (±SE) werden durch lineare Regressionsanalyse des prozentualen Hemmungsgrades berechnet und sind Mittelwerte von mindestens drei Bestimmungen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    T24, BT-474, SK-BR-3, and NCI-H596 cells

  • Konzentrationen

    ~10 μM

  • Inkubationszeit

    4 or 6 days

  • Methode

    Methylene Blue Cell Proliferation Assay. Cells are seeded at 1.5 × 103 cells/well into 96-well microtiter plates and incubated overnight at 37 °C, 5% v/v CO2 and 80% relative humidity. On day 1, dilutions of AEE788 (NVP-AEE788) are added, with the highest concentration being 10 μM. After incubation of the cell plates for an additional 4 (T24) or 6 (BT-474, SK-BR-3, and NCI-H596) days, cells are fixed with 3.3% v/v glutaraldehyde, washed with water, and stained with 0.05% w/v methylene blue. After washing, the dye is eluted with 3% HCl and the absorbance measured at 665 nm with a SpectraMax 340 spectrophotometer. IC50 values are determined by mathematical curve-fitting and are defined as the drug concentration leading to 50% inhibition of net cell mass increase compared with untreated control cultures.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    NCI-H596, DU145, A431, B16 and oncogenic NeuT-transfected HC11 cells in female BALB/c nu/nu (nude) mice

  • Dosierungen

    50 mg/kg

  • Verabreichung

    Dosed orally

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15256466/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15756022/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15867367/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20885895/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17317822/

Kundenproduktvalidierung

<p>EGFR-SGLT1 interaction is irresponsive to modulators of EGFR’s tyrosine kinase. A: Immunoprecipitation coupled Western blot analysis ofinteractionsbetween EGFR-HA and SGLT1-FlaginHEK293 cells treatedwith EGF or AEE788. EGFR, total EGFR; pEGFR, phosphorylated EGFR; IP, immunoprecipitation; IB, immunoblot. Input, expression levels of indicated exogenous proteinsin HEK293 whole celllysates used for the IP.</p>

, , The Prostate, 2013, 73:1453-1461.

Representative images of mitochondria of PC3 cells treated with DMSO, EGF (20 ng/ml) AEE788 (a small molecular EGFR inhibitor at 6 μM) or AEE788+EGF for 24 h. Mitochondria were stained with Mitotracker Red and images were taken with a confocal microscope.

Daten von [ , , Cell Cycle, 2014, 13(15):2415-30 ]

Sellecks AEE788 (NVP-AEE788) Wurde zitiert von 13 Publikationen

A community challenge for a pancancer drug mechanism of action inference from perturbational profile data [ Cell Rep Med, 2022, 3(1):100492] PubMed: 35106508
Comprehensive pharmacogenomic characterization of gastric cancer. [ Genome Med, 2020, 18;12(1):17] PubMed: 32070411
Targeting the non-canonical roles of PCNA modifies and increases the response to targeted anti-cancer therapy [ Oncotarget, 2019, 10(68):7185-7197] PubMed: 31921382
Rationale for Using Irreversible Epidermal Growth Factor Receptor Inhibitors in Combination with Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibitors for Advanced Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. [ Mol Pharmacol, 2019, 95(5):528-536] PubMed: 30858165
Targeted reduction of the EGFR protein, but not inhibition of its kinase activity, induces mitophagy and death of cancer cells through activation of mTORC2 and Akt. [ Oncogenesis, 2018, 7(1):5] PubMed: 29358623
Synergistic induction of apoptosis by salinomycin and gefitinib through lysosomal and mitochondrial dependent pathway overcomes gefitinib resistance in colorectal cancer. [ Oncotarget, 2017, 8(14):22414-22432] PubMed: 26461472
A high-content EMT screen identifies multiple receptor tyrosine kinase inhibitors with activity on TGFβ receptor [ Oncotarget, 2016, 7(18-:25983-6002] PubMed: 27036020
[ Oncotarget, 2015, ] PubMed: 25965827
[ Oncotarget, 2015, ] PubMed: 26378037
Phosphorylation of Mutationally Introduced Tyrosine in the Activation Loop of HER3 Confers Gain-of-Function Activity [Hu Z, et al. PLoS One, 2015, 10(4):e0123623] PubMed: 25853726

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