AG-490

AG-490 hemmt die HER-2-getriebene Zellproliferation mit einer IC50 von 3,5 μM. [1] Entsprechend der spezifischen dosisabhängigen Hemmung von konstitutiv aktiviertem JAK2 in Vorläufer-B-akuten Leukämiezellen (ALL) blockiert diese Verbindung (5 μM) das Wachstum aller ALL-Zellen fast vollständig durch Induktion des programmierten Zelltods, ohne schädliche Auswirkungen auf die normale Hämatopoese. Diese Chemikalie hemmt die Aktivitäten von Lck, Lyn, Btk, Syk und Src nicht. [2] Sie (60-100 μM) blockiert die konstitutive Aktivierung von Stat3sm und hemmt das spontane sowie Interleukin-2-induzierte Wachstum von Mycosis fungoides (MF) Tumorzellen mit IC50-Werten von 75 μM bzw. 20 μM. [3] Diese Verbindung hemmt potent das IL-2-vermittelte Wachstum menschlicher T-Zellen mit einer IC50 von 25 μM, indem sie die Aktivitäten von JAK3 und STAT5a/b blockiert. [4] Sie hemmt signifikant die konstitutive Aktivierung von Stat3 in MOPC-, MPC11- und S194-Zellen, was zu einer dramatischen dosisabhängigen Apoptose führt. [6] Diese Chemikalie (100 μM) hemmt die Akt-Phosphorylierung, hemmt die Aktivierung des nukleären Faktors κB und verursacht die Aktivierung von GSK-3β, was zur Reduktion von c-Myc führt. Sie (50 μM) kann die Apoptose von BaF3-Zellen induzieren, die T315I- und E255K-Mutanten von Bcr-Abl exprimieren. [7] Diese Verbindung bei 30 μM hemmt nicht nur die Epo-induzierte Phosphorylierung von Wildtyp-JAK2, sondern auch die konstitutive Phosphorylierung des JAK2 V617F-Mutanten. Sie hemmt auch potent das Zytokin-unabhängige Zellwachstum, das durch den JAK2 V617F-Mutanten in BaF3-Zellen induziert wird. [8]

Die Verabreichung von AG-490 reduziert drastisch die Anzahl der CD45⁺- und HLA-DR⁺-Zellen von 48 % und 46 % im Knochenmark unbehandelter Mäuse sowie 38 % und 22 % in der Milz unbehandelter Mäuse auf nicht nachweisbare Werte. [2] Die In-vivo-Verabreichung dieser Verbindung führt zur Apoptose muriner Myelom-Tumorzellen, hemmt jedoch nicht die IL-12-vermittelte Makrophagenaktivierung und IFN-γ-Produktion durch Lymphozyten. [6] In Übereinstimmung mit der In-vitro-Blockierung der JAK2 V617F-Mutantenaktivität hemmt die Behandlung mit dieser Chemikalie bei 0,5 mg/Tag über 10 Tage die JAK2 V617F-Mutanten-induzierte Tumorentstehung und Tumorzellinvasion bei Nacktmäusen wirksam. [8] Eine kombinierte Therapie mit diesem Wirkstoff und IL-12 induziert größere Antitumorwirkungen als jeder Wirkstoff allein in einem murinen Myelom-Tumormodell. [6]

• In-vitro-Kinase-Autophosphorylierung

  AG-490 wird in DMSO 10%-H₂O-Ethanol 45% gelöst. Rohe Membranextrakte (0,125 μg/mL) werden mit EGF (20 nM) in 50 mM HEPES-Puffer, pH 7,6, und 125 mM NaCl, 15 Minuten bei 4 °C voraktiviert. Die Autophosphorylierungsaktivität der EGFR- oder ErbB2-Kinase wird bei 4 °C für 30 Sekunden in V-förmigen 96-Well-Platten getestet. Membranextrakte (8 μL) werden zu jeder Vertiefung mit Reaktionsgemisch (12 μL, 50mM, HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 12 mM M₈Ac₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM NaVO₃, 1 μM ATP und 1 μCi[γ-³²P]ATP, Endkonzentrationen) und zunehmenden Konzentrationen dieser Verbindung (4 μL) gegeben. Nach Beendigung durch Zugabe von heißem Probenpuffer werden die Proben auf einer 6%igen SDS-Polyacrylamidgel-Elektrophorese-Minigel aufgetragen, die Gele getrocknet und eine Autoradiographie während der linearen Expositionszeit durchgeführt. Die Rezeptorbanden werden densitometrisch gescannt und die Ergebnisse mit dem Ez-Fit-Programm analysiert. Zur Analyse der Autophosphorylierung von JAK2 wird JAK2 mittels Anti-JAK2-Antikörper aus Lysaten von G2-Zellen immunpräzipitiert, die 16 Stunden lang mit zunehmenden Konzentrationen dieser Chemikalie (0-50 μM) vorbehandelt wurden. Immunkomplexe werden dann mit Anti-Phosphotyrosin-Antikörpern immungeblottet. Eine dosisabhängige Hemmung der In-vitro-Kinaseaktivität wird durch Bewertung der JAK2-Autophosphorylierung nachgewiesen.

• Zelllinien

  Pre-B ALL

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 50 μM

• Inkubationszeit

  16 hours

• Methode

  Cells are exposed to different concentrations of AG-490 for 16 hours. For the determination of cell proliferation, [³H]tymidine (1 μCi) is added 6 hours or more before the cultures are terminated. Cells are then collected and samples counted in a liquid scintillation counter.

• Tiermodelle

  SCID mice intravenously injected with ALL cells

• Dosierungen

  0.85 mg + 0.5 mg daily

• Verabreichung

  Continuous pump infusion supplemented with daily intraperitoneal injections