Saracatinib (AZD0530)

Saracatinib (AZD0530) hemmt auch potent andere Mitglieder der Src-Tyrosinkinasefamilie, einschließlich c-Yes, Fyn, Lyn, Blk, Fgr und Lck mit IC50-Werten von 4-10 nM. Es hemmt empfindlich Src Y530F NIH 3T3 mit einer IC50 von 80 nM. Diese Verbindung beeinträchtigt signifikant die Invasion von HT1080-Zellen durch eine dreidimensionale Kollagenmatrix und hemmt vollständig die EGF-induzierte Zellstreuung in NBT-II-Blasenkrebszellen. [1] Es hemmt potent die Src-Aktivierung in DU145- und PC3-Zellen durch Hemmung der Y419-Phosphorylierung. Es hemmt das Wachstum von Prostatakrebs, einschließlich PC3, DU145, CWR22Rv1 und LNCaP, während es eine geringe Aktivität in LAPC-4-, PZ-HPV7- und RWPE-1-Zellen zeigt. Es induziert einen Zellzyklusarrest an G1/S, aber keine Caspase-3-Spaltungen. Es hemmt auch signifikant die Migration von DU145 und PC3 in der Boyden-Kammer. [2] Es bewirkt eine potente und anhaltende Blockade von AKT und erhöht die Empfindlichkeit gegenüber Bestrahlung in A549- und Calu-6-Zellen. [3] Es hemmt Osteoklasten in ihrer Aktivität, Resorption und Bildung. Es verhindert auch reversibel die Migration von Osteoklastenvorläufern. [4]

Saracatinib (AZD0530) zeigt eine starke Hemmung des Tumorwachstums in Src3T3-Allotransplantaten und eine moderate Wachstumsverzögerung in Calu-6-, MDA-MB-231-, AsPc-1- und BT474C-Xenotransplantaten. [1] Diese Verbindung zeigt auch eine starke Antitumoraktivität in orthotopen DU145-Xenotransplantatmäusen bei einer Dosis von 25 mg/kg (oral verabreicht, täglich). [2]

• Kinase-Assay

  Die IC50 der Tyrosinkinaseaktivität wird mittels eines enzymgekoppelten Immunosorbent-Assays (ELISA) mit rekombinanten katalytischen Domänen einer Reihe von Rezeptor- und Nicht-Rezeptor-Tyrosinkinasen gemessen (in einigen Fällen wird nur ein Teil der katalytischen Domäne verwendet). Diese Verbindung dosis liegt im Bereich von 0,001-10 mM. Spezifitätsassays gegen eine Reihe von Serin/Threonin-Kinasen werden unter Verwendung eines Filterfangassays mit ³²P durchgeführt. Kurz gesagt, Multidrop-384-Platten, die 0,5 μL Saracatinib (AZD0530) oder Kontrollen (nur DMSO oder pH 3,0 Pufferkontrollen) enthalten, werden 5 min lang mit 15 μL Enzym plus Peptid/Proteinsubstrat inkubiert, bevor die Reaktion durch Zugabe von 10 μL 20 mM Mg-ATP eingeleitet wird. Für alle Enzyme wird die Endkonzentration an die Michaelis-Konstante (K_m) angenähert. Die Assays werden 30 min bei Raumtemperatur durchgeführt, bevor sie durch Zugabe von 5 μL Orthophosphorsäure beendet werden. Nach dem Mischen werden die Well-Inhalte auf eine P81 UniFilter-Platte gesammelt, wobei Orthophosphorsäure als Waschpuffer verwendet wird. Anschließend wird die IC50 berechnet.

• Zelllinien

  PC3, DU145, CWR22Rv1, LNCaP, LAPC-4, PZ-HPV7 and RWPE-1 cells

• Konzentrationen

  62.5 nM - 16 mM

• Inkubationszeit

  1, 3 and 5 days

• Methode

  After seeding cells at a density of 2×10³ in 96-well plates and incubating overnight, Saracatinib (AZD0530) (62.5 nM-16 mM) is added. After 1, 3 and 5 days, culture medium is removed followed by addition of 0.2 mL DMSO per well and continuous shaking of plates at 200 rotations per minute for 15min. Then IC50 is measured by MTT metho

• Tiermodelle

  CB17 mice are implanted with DU145 cells.

• Dosierungen

  25 mg/kg

• Verabreichung

  Orally administered daily