Abiraterone Acetate

Abiraterone zeigt nur in SM1 eine gute Komplexierung mit dem Häm-Eisen. [1] Abiraterone blockiert die Synthese von Androgenen durch Hemmung von CYP17A1. Abiraterone blockiert auch die 3β-Hydroxysteroid-Dehydrogenase (3βHSD), ein Enzym, das für die Synthese biologisch aktiver Androgene unbedingt erforderlich ist. Abiraterone hemmt die Umwandlung von DHEA in Δ⁴-Androstenedion. Die Hemmung von 3βHSD durch Abiraterone blockiert die DHT-Synthese und die Androgen Receptor-Antwort. Abiraterone hemmt die Umwandlung von Δ⁵-Androstenediol in Testosteron. [2] Abiraterone hemmt die C_17,20-Lyase mit einem IC50-Wert von 5,8 nM in Mikrosomen aus Rattenhoden. Abiraterone hemmt die Testosteronsekretion signifikant (−48%) und erhöht im Gegenzug die LH-Konzentration (192%). [3] Abiraterone hemmt die In-vitro-Proliferation und die AR-regulierte Genexpression von AR-positiven Prostatakrebszellen, was zusätzlich zur Hemmung der Steroidogenese durch AR-Antagonismus erklärt werden könnte. [4]

Nach intraperitonealer Verabreichung in einem Nagetiermodell wurde festgestellt, dass Abiraterone eine schnelle Deacetylierung aufweist. Wenn es als Acetat-Prodrug (CB 7630) verabreicht wurde, unterdrückte es den zirkulierenden Testosteronspiegel bis zu nicht nachweisbaren Werten und verringerte deutlich das Gewicht der Androgen-sensitiven Organe. Abiraterone ist gut verträglich und die mittlere Eliminationshalbwertszeit von Abiraterone betrug in diesen Studien 27,6 h (was die einmal tägliche Dosierung unterstützt)[5]. Präklinische Studien mit Abiraterone zeigten eine Reduktion der Androgenproduktion nach CYP17, was zu einem verringerten Gewicht der ventralen Prostata, Hoden und Samenbläschen bei Mäusen führte[6].

• C_17,20-Lyase-Aktivitätstest

  Mikrosomen werden in der Reaktionsmischung, die 0,25 M Saccharose, 20 mM Tris-HCl (pH 7,4), 10 mM G6P und 1,2 IU/mL G6PDH enthält, auf eine Proteinkonzentration von 50 μg/mL verdünnt. Nach 10-minütiger Äquilibrierung bei 37 °C wird die Reaktion durch Zugabe von βNADP initiiert, um eine Endkonzentration von 0,6 mM zu erreichen. Vor der Verteilung von 600 μL der Reaktionsmischung in jedes Röhrchen werden die Testverbindungen unter einem Stickstoffstrom zur Trockne eingedampft und anschließend 10 Minuten bei 37 °C inkubiert. Nach der Inkubation mit Abiraterone werden 500 μL der Reaktionsmischung in Röhrchen überführt, die 1 μM des Enzymsubstrats 17OHP enthalten. Nach weiteren 10 Minuten Inkubation werden die Röhrchen auf Eis gelegt und die Reaktion durch Zugabe von 0,1 ml NaOH 1N gestoppt. Die Röhrchen werden tiefgefroren und bei -20 °C gelagert, bis sie auf Δ4A-Spiegel getestet werden. Ein Δ4A RIA wird in unserem Labor auf einem Mikroplattenformat unter Verwendung eines spezifischen Antikörpers gegen Δ4A und den von Biogenesis bereitgestellten Anweisungen entwickelt und automatisiert. Die Trennung von freiem und gebundenem Antigen wird mit einer Dextran-beschichteten Kohlesuspension erreicht. Nach der Zentrifugation werden Aliquots des klaren Überstands in Duplikaten in einem Flüssigszintillationszähler gezählt. Die Δ4A-Konzentrationen unbekannter Proben werden aus der Standardkurve bestimmt. Die Nachweisgrenze beträgt 0,5 ng/mL, und die Variationskoeffizienten innerhalb und zwischen den Assays betragen 10,7 bzw. 17,6 % bei einem Assay-Wert von 13 ng/mL. Die Rate der enzymatischen Reaktion wird als pmol Δ4A, gebildet pro 10 Minuten und pro mg Protein, ausgedrückt. Der Wert der maximalen Aktivität ohne Inhibitor (Kontrolle) wird auf 100 % gesetzt. Die IC50-Werte werden mittels nicht-linearer Analyse aus dem Plot der Enzymaktivität (%) gegen den Logarithmus der Inhibitor-Konzentration berechnet.

• Zelllinien

  LNCaP and VCaP cells

• Konzentrationen

  0 μM -10 μM

• Inkubationszeit

  24 hours and 96 hours

• Methode

  LNCaP and VCaP cells are seeded in 96-well plates and grown in CSS-supplemented phenol red-free or FBS-supplemented media for 7 days. Cells are treated with Abiraterone at 24 hours and 96 hours after plating and cell viability is determined on day 7 by adding CellTiter Glo and measuring luminescence.

• Tiermodelle

  Male NOD/SCID mice with LAPC4 cells

• Dosierungen

  0.5 mmol/kg/d

• Verabreichung

  Administered via s.c.