Apatinib (YN968D1) mesylate

Apatinib (YN968D1) is a novel, orally bioavailable, selective inhibitor with potential antiangiogenic and antineoplastic activities. Apatinib selectively binds to and inhibits VEGFR2. Apatinib can also potently suppress the activities of Ret, c-kit and c-src with IC50 of 0.013 μM, 0.429 μM and 0.53 μM, respectively. Apatinib inhibits cellular phosphorylation of VEGFR-2, c-kit and PDGFRβ. Apatinib significantly inhibits proliferation stimulated by 20 ng/mL VEGF (IC50 = 0.17μM). Apatinib effectively inhibits proliferation, migration and tube formation of human umbilical vein endothelial cells induced by FBS, and blocked the budding of rat aortic ring. [1] Apatinib reverses ABCB1- and ABCG2-mediated MDR by inhibiting their transport function, but not by blocking the AKT or ERK1/2 pathway or downregulating ABCB1 or ABCG2 expression. Apatinib significantly potentiates the cytotoxicity of established ABCB1 and ABCG2 substrates and increased the accumulation of DOX and Rho 123 in ABCB1- or ABCG2-overexpressing cells. Furthermore, apatinib significantly inhibited the photoaffinity labeling of both ABCB1 and ABCG2 with [¹²⁵I]iodoarylazidoprazosin in a concentration-dependent manner. [2]

Apatinib inhibits the growth of a broad range of human tumor xenografts in a significant dose-dependent manner. [1] Apatinib reverses ABCB1-mediated MDR in the nude mouse xenograft model. [2] Apatinib significantly enhances the antitumor activity of doxorubicin in nude mice bearing K562/ADR xenografts. [3]

• Enzyme-linked immunosorbent assay

  Ein Poly(glu, ala, tyr) 6:3:1 Randomcopolymer wird als Tyrosin-enthaltende Substratlösung verwendet. Das Substrat wird als 1 mg/mL Stammlösung in PBS bei -20 °C gelagert und 1:500 mit PBS verdünnt, um 96-Well-Platten (100 μL/Well) zu beschichten. Die Platten werden am Tag vor dem Assay beschichtet, mit Klebefolien versiegelt und über Nacht bei 4 °C gelagert. Am Tag des Assays wird die Substratlösung verworfen und die Wells der Assayplatte einmal mit PBST (PBS mit 0,05% v/v Tween 20) und einmal mit Hepes-Puffer (50 mM, pH 7,4) gewaschen. Testsubstanzen werden mit 10% DMSO deionisiertem Wasser verdünnt und 25 μL-Volumina in die Wells der gewaschenen Assayplatten überführt. Manganchloridlösung (40 mM) mit 8 μM ATP wird dann (25 μL) zu allen Testwells gegeben. Kontroll- und Blindwells, die Verdünnungsmittel der Verbindung und Manganchloridlösung mit und ohne ATP enthalten, werden ebenfalls eingeschlossen, um den dynamischen Bereich des Assays zu bestimmen. Frisch verdünntes Enzym (50 μL) wird zu jedem Well gegeben und die Platten 20 min bei Raumtemperatur inkubiert. Die Flüssigkeit wird dann verworfen und die Wells zweimal mit PBST gewaschen. Maus-IgG-Anti-Phosphotyrosin-Antikörper, 1:6000 mit PBST, das 0,5% (w/v) Rinderserumalbumin (BSA) enthält, verdünnt, wird hinzugefügt (100 μL/Well) und die Platten 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, bevor die Flüssigkeit verworfen und die Wells zweimal mit PBST gewaschen werden. Mit Meerrettichperoxidase (HRP) gekoppelter Schaf-Anti-Maus-Ig-Antikörper, 1:500 mit PBST, das 0,5% (w/v) BSA enthält, verdünnt, wird dann hinzugefügt (100 μL/Well) und die Platten weitere 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert, bevor die Flüssigkeit verworfen und die Wells zweimal mit PBST gewaschen werden. Eine 1 mg/mL Lösung von 2,2‘-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonsäure wird frisch in 50 mM Phosphat-Citrat-Puffer (pH 5,0) hergestellt, der 0,03% (w/v) Natriumperborat enthält, und 100 μL werden jedem Well hinzugefügt. Die Platten werden dann 20-60 min bei Raumtemperatur inkubiert, bis der optische Dichtewert der Kontrollwells, gemessen bei 405 nm, ungefähr 1,0 beträgt. IC50-Werte für die Enzymhemmung durch die Verbindung werden unter Verwendung von Microcal Origin nach Subtraktion der Blindwerte interpoliert.

• Zelllinien

  HUVEC

• Konzentrationen

  ~25 μM

• Inkubationszeit

  72 h

• Methode

  The HUVEC are seeded into 96-well plates. After 24 h of incubation, cells are exposed to the test agents (vehicle as control) together with 20 ng/mL VEGF or 20% FBS for another 72 h. After fixation with 10% trichloroacetic acid, the cells are stained with 0.4% sulforhodamine B for 30 min at 37 °C and then washed with 1% acetic acid. Tris is added to dissolve the complex, and the optical density is measured at 520 n

• Tiermodelle

  Ls174t, HCT 116, SGC-7901, HT-29, A549, NCI-H460 xenografted BALB/cA nude mice

• Dosierungen

  50, 100, 200 mg/kg

• Verabreichung

  p.o.