Atazanavir (BMS-232632) Sulfate

Atazanavir hemmt die proteolytische Spaltung des viralen Gag-Vorläufers p55 Polyprotein mit einer IC50 von ~47 nM in virusinfizierten H9-Zellen. Atazanavir zeigt eine potente antivirale Aktivität mit einer EC50 von 3,89 nM in RF/MT-2-Stämmen. [1]. Atazanavir ist ein Inhibitor der Bilirubin-Glucuronidierung mit einer IC50 von 2,4 μM. Atazanavir hemmt die rekombinante UGT1A1 mit einem Ki von 1,9 μM. [2] Atazanavir hemmt das Zellwachstum in U251-, T98G- und LN229-Glioblastom-Zelllinien, mit auffallend erhöhten GRP78- und CHOP-Proteinspiegeln. Atazanavir verursacht eine deutliche Zunahme polyubiquitinierter Proteine verschiedener Größen in U251-Glioblastomzellen. [3] Atazanavir hemmt auch das menschliche 20S Proteasom mit einer IC50 von 26 μM. Atazanavir (30 μM) verändert die Stärke des ER-Stresses und der UPR-Genexpression in HepG2-Zellen. [4] Atazanavir (30 mM) führt zu einem 2,5-fachen Anstieg der immunoreaktiven P-gp-Expression mit vermindertem intrazellulärem Rh123 in LS180V-Zellen. [5]

• Protease assays

  Zur Bestimmung der Inhibitionskonstanten (Ki) für jeden Prt-Inhibitor wird gereinigtes HIV-1 RF Wildtyp Prt (2,5 nM) bei 37 ℃ mit 1 μM bis 15 μM fluorogenem Substrat in Reaktionspuffer (1 M NaCl, 1 mM EDTA, 0,1 M Natriumacetat [pH 5,5], 0,1 % Polyethylenglykol 8000) in An- oder Abwesenheit von Atazanavir inkubiert. Die Spaltung des Substrats wird durch Messung eines Anstiegs der Fluoreszenzemission bei 490 nM nach Anregung bei 340 nM unter Verwendung eines Cytofluor 4000 quantifiziert. Die Reaktionen werden unter Verwendung von 1,36 μM, 1,66 μM, 2,1 μM, 3,0 μM, 5,0 μM oder 15 μM Substrat in Anwesenheit von fünf Konzentrationen von Atazanavir (1,25 nM bis 25 nM) durchgeführt. Die Substratspaltung wird in 5-minütigen Intervallen für 30 min überwacht. Die Spaltungsraten werden dann für jede Probe zu frühen Zeitpunkten der Reaktion bestimmt, und die Ki-Werte werden aus den Steigungen der resultierenden Michaelis-Menten-Diagramme ermittelt.

• Zelllinien

  RF/MT-2 strains

• Konzentrationen

  15 nM

• Inkubationszeit

  6 days

• Methode

  To determine cytotoxicity, host cells are incubated in the presence of serially diluted Atazanavir for 6 days and cell viability is quantitated using an XTT[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] assay to calculate the 50% cytotoxic concentrations (CC50s). To assess the effect of human serum proteins on antiviral activity, the 10% fetal calf serum normally used for assays is replaced with 40% adult human serum or 1 mg of α1-acid glycoprotein/mL.