Avasimibe

Avasimibe in einer Konzentration von 1 μg/mL führt zu einer Reduktion des Gesamtcholesterins (TC) und des veresterten Cholesterins (EC) durch Hemmung der LDL-Bindung und Verringerung der Anzahl von Scavenger-Rezeptoren während der Schaumzellbildung in menschlichen Monozyten-abgeleiteten Makrophagen (HMMs). Diese Verbindung in einer Konzentration von 2 μg/mL erhöht den Cholesterinflux aus etablierten HMM-Schaumzellen, die mit 10 μg/ml LDL vorinkubiert wurden. [1] Es hemmt die Lipoprotein(a)-Akkumulation in den Kulturmedien primärer Affenhepatozyten dosisabhängig mit 11,9 % -31,3 % Hemmung, wobei die Veränderung hauptsächlich mit einem verringerten ApoA assoziiert ist. [2] Diese Chemikalie, die in Konzentrationen von 10 nM, 1 μM und 10 μM für 24 Stunden in HepG2-Zellen inkubiert wird, reduziert die ApoB-Sekretion in die Medien um 25 %, 27 % bzw. 43 %. Es verringert die ApoB-Sekretion durch eine verbesserte intrazelluläre Degradation von ApoB anstatt einer verringerten Synthese von ApoB. [3] Die Verbindung hemmt ACTC mit einer IC50 von 3,3 μM in IC-21 Makrophagen unter Berücksichtigung der Gesamtinhibitor-Konzentration in der Assay-Probe. [4] Es hemmt die humanen P450-Isoenzyme CYP2C9, CYP1A2 und CYP2C19 mit IC50 von 2,9 μM, 13,9 μM bzw. 26,5 μM. [5] Dieser Inhibitor hemmt die ACAT-1-Expression und die Cholesterinester-Synthese in Gliomzelllinien. Er hemmt das Wachstum der Gliomzellen, indem er den Zellzyklusarrest und die Apoptose aufgrund der Caspase-8- und Caspase-3-Aktivierung induziert. [6]

Avasimibe reduziert signifikant die Lipoprotein(a)- und Gesamtcholesterinspiegel bei neun gesunden männlichen Affen mit einer normalen Futterdiät, die drei Wochen lang oral mit CI-1011 in einer Dosis von 30 mg/kg pro Tag behandelt wurden. Die Lipoprotein(a)- und Gesamtcholesterinspiegel reduzieren sich auf 68 % bzw. 73 % der Kontrollwerte. Diese Verbindung senkt das Gesamtcholesterin hauptsächlich aufgrund einer Reduktion des Low-Density-Lipoproteins (LDL). [2] Sie verringert die Amyloidplaquebelastung in Kortex und Hippocampus und reduziert die Spiegel von unlöslichem Abeta40 und Abeta42 sowie C-terminalen Fragmenten des Amyloid-Vorläuferproteins (APP) in Gehirnextrakten bei jungen humanen APP-transgenen Mäusen. Diese Chemikalie reduziert diffuse Amyloidplaques durch Unterdrückung der Astrogliose und verstärkte mikrogliale Aktivierung bei gealterten humanen APP-transgenen Mäusen. [7]

• P450 Hemmstudien

  Gepoolte menschliche Lebermikrosomen (HLM) von mindestens 15 Spendern werden für alle Hemmtests verwendet. Für die IC50-Bestimmungen werden die Substratsonden bei ihren ungefähren In-vitro-Km-Werten verwendet. Alle Inkubationen werden mit 100 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 7,4) und 1 mM NADPH durchgeführt. Für die CYP1A2-Hemmstudie werden Inkubationen in einem Gesamtvolumen von 0,5 ml, in Duplikaten mit 0,1 mg/ml HLM, 30 μM Phenacetin, 1 mM NADPH und in Anwesenheit dieser Verbindung (0, 0,3, 0,75, 1,5, 3, 7,5, 15, 30 und 40 μM in 50 mM) in einem Kaliumphosphatpuffer bei pH 7,4 durchgeführt. Nach einer Vorinkubation bei 37 °C für 7 min wird NADPH hinzugefügt, um die Enzymreaktion zu initiieren. Das Reaktionsgemisch wird nach 25 min mit 500 μl eisgekühltem 100 ng/ml Paracetamol-D₄/CH₃CN abgeschreckt. Die Standards (4-Acetamidophenol, Singulett) und Qualitätskontrollen (Triplikate für niedrig, mittel und hoch) werden bei Raumtemperatur hergestellt. Nach dem Mischen werden 0,2 ml der Proben auf eine andere Platte übertragen und nach Zentrifugation bei 3000 U/min für 10 min zur LC/MS/MS-Analyse eingereicht. Eine Supelco Discovery Amide C16, 100 × 2,1 mm (5-μm Partikelgröße) Säule (Supelco, Bellefonte, PA) wird verwendet. Die mobile Phase ist isokratisch, 40:60 [Acetonitril/Ameisensäure, 0,1 % (v/v)] bei 0,2 ml/min.

• Zelllinien

  primary human monocyte-derived macrophages

• Konzentrationen

  1 μg/mL or 2 μg/mL

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  For foam cell formation, the growth medium (RPMI medium containing 10% human serum) is aspirated and the BMMs are rinsed four times with RPMI medium, and then HMMs are exposed to RPMI medium containing bovine serum albumin (BSA, 0.2%) and (DMSO, 0.2%, vehicle for CI-1011) (control medium) with and without agacLDL (100 μg protein/ml) and this compound (1 μg/ml) for 48 hours. For cholesterol efflux experiments, HMMs are preincubated with ag-acLDL (100 μg protein/ml) for 24h, and then exposed to control RPMI medium with and without HDL (100 μg protein/ml), this compound (2 μg/ml) or HDL plus this compound (2 μg/ml) for 24–48 hours. Additionally, the appearance of [¹⁴C]FC in the medium is monitored by first preincubating HMMs with RPMI medium containing ag-acLDL (100 μg protein/ml) radiolabeled with [4-¹⁴C]FC (0.5 μCi/ml) in an ethanolic spritz (final concentration, 0.1%) for 24 h. The medium is removed, cells rinsed three times with RPMI medium, and then cells are exposed to control RPMI medium with and without this compound (1–10 μg/ml) for 4–48 h. At each time point, the medium is aspirated and centrifuged to pellet nonadherent cells. The appearance of [¹⁴C]FC in the medium is measured by liquid scintillation spectroscopy. Cellular lipids are extracted using hexane:isopropanol (3:2, v/v) for 1 h. The distribution of cellular radiolabeled cholesterol is measured by subjecting an aliquot of the cell extract and FC and EC standards to thin layer chromatography using petroleum ether:hexane:glacial acetic acid solvent system (85:15:2, v/v). The percent FC efflux is calculated as: medium [¹⁴C]FC dpm/ cell [¹⁴C] dpm×100. FC and TC mass are quantified by gas liquid chromatography using stigmasterol (1 mg/ml) as an internal standard. EC mass is calculated as the difference between TC and FC, and all values are normalized to cell protein. The MBC is defined as the lowest concentration that exhibited 99.9% or more reduction of the numbers of colonies compared with the cfu in the initial inoculum.

• Tiermodelle

  male cynomolgus monkeys

• Dosierungen

  30 mg/kg

• Verabreichung

  Orally at a single dose per day for 3 weeks