BMS-777607

BMS-777607 ist ein selektiver ATP-kompetitiver Met-Kinaseinhibitor, der die Autophosphorylierung von c-Met mit einer IC50 von 20 nM in GTL-16-Zelllysaten potent blockiert und eine selektive Hemmung der Proliferation in Met-getriebenen Tumorzelllinien wie der GTL-16-Zelllinie, H1993 und U87 zeigt. [1] Diese Verbindung hemmt die durch hepatocyte growth factor (HGF) ausgelöste c-Met-Autophosphorylierung mit einer IC50 von <1 nM in PC-3- und DU145-Prostatakrebszellen. Diese Verbindung hat wenig Einfluss auf das Wachstum von Tumorzellen, zeigt aber eine hemmende Wirkung auf die HGF-induzierte Zellstreuung in PC-3- und DU145-Zellen, mit fast vollständiger Hemmung bei 0,5 M. Sie unterdrückt auch die stimulierte Zellmigration und -invasion dosisabhängig (IC50 < 0,1 M) in beiden Zelllinien. [2] Die Anwendung dieser Verbindung (~10 M) auf die hochmetastatischen murinen KHT-Zellen für 2 Stunden eliminiert potent die basalen Spiegel von autophosphoryliertem c-Met mit einer IC50 von 10 nM, ohne das gesamte c-Met zu beeinflussen, was zu einer dosisabhängigen Hemmung der Phosphorylierung nachgeschalteter Signalmoleküle einschließlich ERK, Akt, p70S6K und S6 führt. Die Behandlung mit dieser Verbindung (~1 M) für 24 Stunden hemmt potent die Streuung, Motilität und Invasion von KHT-Zellen in nanomolaren Dosen, was mit dem MET-Gen-Knockdown übereinstimmt, und beeinflusst die Zellproliferation und Koloniebildung mäßig. [3]

Die orale Verabreichung von BMS 777607 (6,25-50 mg/kg) reduziert signifikant das Tumorvolumen von GTL-16-Human-Tumor-Xenotransplantaten in athymischen Mäusen ohne beobachtete Toxizität. [1] Die Verabreichung dieser Verbindung (25 mg/kg/Tag) verringert die Anzahl der KHT-Lungentumornoduli (28,3 %), verbessert die morphologische Hämorrhagie und beeinträchtigt signifikant den metastatischen Phänotyp bei 6-8 Wochen alten weiblichen C3H/HeJ-Mäusen, denen murine Fibrosarkom-KHT-Zellen injiziert wurden, ohne offensichtliche systemische Toxizität im Vergleich zur Kontrollbehandlung. Eine niedrige Dosis dieser Chemikalie (10 mg/kg) bietet auch eine milde, aber nicht signifikante Hemmung der Lungenknötchenbildung im Vergleich zur Vehikelkontrolle. [3]

• Met-Kinase-Assay

  Die Kinase-Reaktion besteht aus im Baculovirus exprimiertem GST-Met, 3 Lg Poly(Glu/Tyr), 0,12 Ci ³³P -ATP, 1 M ATP in 30 L Kinase-Puffer (20 mM Tris-Cl, 5 mM MnCl2, 0,1 mg/mL BSA, 0,5 mM DTT). Die Reaktionen werden 1 Stunde bei 30 °C inkubiert und durch Zugabe von kalter Trichloressigsäure (TCA) zu einer Endkonzentration von 8 % gestoppt. TCA-Präzipitate werden mittels eines Filtermate Universal Harvester auf GF/C-Unifilterplatten gesammelt, und die Filter werden mittels eines TopCount 96-Well Liquid Scintillation Counter quantifiziert. Dosis-Wirkungs-Kurven werden erstellt, um die Konzentration zu bestimmen, die erforderlich ist, um 50 % der Substratphosphorylierung zu hemmen (IC50). Diese Verbindung wird in 10 mM DMSO gelöst und in 10 Konzentrationen, doppelt, evaluiert.

• Zelllinien

  Rodent fibrosarcoma KHT cells

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO as a stock solution (10 mM), final concentration ~10 μM.

• Inkubationszeit

  2, 24 and 96 hours

• Methode

  KHT cells are exposed to serial dilution of BMS 777607 for 96 hours, then the MTT assay and trypan blue exclusion are used for the determination of cell proliferation and cell death, respectively. KHT cell colonies are incubated with this compound for 24 hours and then stained with crystal violet (0.1%) and photographed for the assessment of cell scattering. 2 mm scratch on the confluent KHT cell monolayer is made using a sterilized 1 ml pipette tip followed by treated with this compound for 24 hours, then the number of cells that have migrated into the denuded area is counted on 4 random fields for the evaluation of cell migration. For the examination of cell invasion, the commercial transwell inserts (8 μm pore membrane) pre-loaded with Matrigel are incubated with serum-free medium in the presence or absence of this compound at 37 °C for 2 hours to allow rehydration of Matrigel. Then cells suspended in serum-free medium are loaded onto the top chamber (5 × 10³/insert) and complete medium (containing 10% FBS) is used in the lower chamber as a chemoattractant. After incubation for 24 hours, the Matrigel is removed and the inserts are stained with crystal violet. Invaded cells on the underside of the filter are photographed and counted.

• Tiermodelle

  Rodent fibrosarcoma KHT cells are established in female C3H/HeJ mice.

• Dosierungen

  10-25 mg/kg.

• Verabreichung

  Oral gavage once daily.