Daclatasvir (BMS-790052)

Katalog-Nr.S1482 Charge:S148202

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Technische Daten

Formel

C40H50N8O6
Molekulargewicht 738.88 CAS-Nr. 1009119-64-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 148 mg/mL (200.3 mM)
Ethanol 148 mg/mL (200.3 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Daclatasvir (BMS-790052, EBP883) ist ein hochselektiver Inhibitor von HCV NS5A mit einer EC50 von 9-50 pM für eine breite Palette von HCV-Replikongenotypen und dem infektiösen JFH-1 Genotyp 2a Virus in Zellkultur. Phase 3.
Ziele
HCV NS5A
9 pM-50 pM(EC50)
In vitro Daclatasvir (BMS-790052) ist einer der bisher potentesten Inhibitoren der HCV-Replikation. Die mittleren EC50-Werte dieser Verbindung betragen 50 und 9 pM für HCV-Genotyp 1a bzw. 1b Replikone. Es zeigt einen therapeutischen Index (CC50/EC50) von mindestens 105 und ist inaktiv gegenüber einer Reihe von 10 RNA- und DNA-Viren, mit EC50 höher als 10 μM. Dies bestätigt seine Spezifität für HCV. In Huh7-Zellen, die die HCV-Genotyp-1b-Replikone beherbergen, blockiert es sowohl die transiente als auch die stabile HCV-Genomreplikation mit EC50-Werten im Bereich von 1-15 pM. Bei Konzentrationen von 100 pM oder 1 nM wurde gezeigt, dass es die subzelluläre Lokalisation und biochemische Fraktionierung von NS5A verändert. Diese Verbindung hemmt Hybridreplikone, die HCV-Genotyp-4 NS5A-Gene enthalten, mit einer EC50 von 7-13 pM. Residue 30 von NS5A ist eine wichtige Stelle für die BMS-790052-vermittelte Resistenz in den Hybridreplikonen.
Merkmale Erstklassiger, hochselektiver Inhibitor des Hepatitis-C-Virus (HCV) NS5A mit picomolaren EC50-Werten.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[4]
  • FRET-Assay für HCV NS5A-Inhibitoren

    Das Peptid (Ac-Asp-Glu-Asp [EDANS]-Glu-Glu-Abu-[COO] Ala-Ser-Lys [DABCYL]-NH2) enthält einen Fluoreszenzdonor {EDANS, 5-[(2-Aminoethyl)amino]naphthalin-1-sulfonsäure} in der Nähe eines Endes und einen Akzeptor {DABCYL, 4-[(4-Dimethylamino)phenyl]azo}benzoesäure} in der Nähe des anderen Endes. Der intermolekulare Resonanzenergietransfer zwischen Donor und Akzeptor löscht die Fluoreszenz des Peptids, aber wenn die NS3-Protease das Peptid spaltet, werden die Produkte aus der Resonanzenergietransferlöschung freigesetzt. Wenn mehr Substrat durch die NS3-Protease gespalten wird, nimmt die Fluoreszenz des Donors mit der Zeit zu. Die Nachweisreagenzien sind: 5× Luciferase-Zellkultur-Lysereagenz, mit dH2O auf 1× verdünnt, Zugabe von NaCl (150 mM) und FRET-Peptid (20 μM). HCV-Huh-7-Zellen wurden in 96-Well-Platten gegeben und über Nacht haften gelassen (1×104 Zellen pro Well). Am nächsten Tag wurde Daclatasvir (BMS-790052) in die Wells gegeben und die Platte 72 Stunden inkubiert. Anschließend wurden die Platten mit PBS gewaschen und ein FRET-Assay durch Zugabe von 30 μL der oben genannten FRET-Peptid-Nachweisreagenzien zu jedem Well durchgeführt. Die Signale wurden mit einem Cytofluor 4000-Gerät erfasst, das auf 340 nm (Anregung)/490 nm (Emission) im Automatikmodus eingestellt war, 20 Zyklen oder weniger lief und die Platte im kinetischen Modus ablas. Nach dem FRET-Assay wurden 40 μL Luciferase-Substrat zu jedem Well gegeben und die Luciferase-Aktivität gemessen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    HCV replicon cells (Huh7)

  • Konzentrationen

    0.1 pM - 50 μM, dissolved in DMSO (the final concentration of DMSO is 0.5%)

  • Inkubationszeit

    72 hours

  • Methode

    Daclatasvir (BMS-790052) is added to 96-well plates containing HCV replicon cells seeded approximately 12 hours before in 200 µL media. The cell plates are tested for replication activity and cytotoxicity after 72 hours of incubation. Cytotoxicity is measured with CellTiter-Blue, after which the media and dye are removed, plates are inverted and the remaining liquid is blotted with paper towels. Replication activity of the HCV genotype 1a cell lines is quantified using Renilla luciferase. 1× Renilla luciferase lysis buffer (30 µL) is added to each well and plates are incubated with gentle shaking for 15 min. Renilla luciferase substrate (40 µL) is then added and the signals are detected using a Top Count luminometer set for light emission quantification. One hundred per cent activity is calculated for each cell line for the DMSO-only wells; percentage activity is calculated for each concentration of the inhibitor by dividing the average value for wells containing this compound by the average value for wells containing DMSO.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20410884/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21513964/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22203595/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15793110/

Kundenproduktvalidierung

<p>The toxicity of BMS-790052 (BMS) and Telaprevir (TPV) was measured by seeding 96-well plates to 70% confluence and exposing the cells to up to 50 μM of compound for 72 hours. MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] was added to each well at a final concentration of 500 μg/ml 4 h before dissolving crystals in 100 μl of DMSO and measuring at 550 nm UV wavelengths. The 50% cytotoxic concentration (CC50) was then calculation using the OD550 value and the following formula: log CC50=log concentration of HPP-[(HPP-50)/(HPP-LPP)×log d HPP: highest protective percentage closest to 50% LPP: Lowest protective percentage closest to 50% d: dilution factor</p>

, 2011 , Dr. Julie Sheldon,Dr Esteban Domingo and Dr Celia Perales

<p>Huh7.5 cells were infected with JFH-1 (2a) strain. Once the cells reached 80% infectivity they were treated with pMconcentration of BMS790052 for two different time points. Cells were collected in SDS sample loading buffer and probed for NS5A and GAPDH. After 16hrs hyperphosphorylated NS5A disappeared with increasing concentration of the drug. 40hrs of treatment resulted complete disappearance of NS5A. GAPDH is internal control.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

<p>80% infected HCV JFH-1 cells were treated with several concentrations of BMS790052 in pMrange. Cells were fixed after 16hrs and NS5A was probed.Cells treated with BMS790052 shows NS5A present in clusters compared to an even cytoplasmic distribution in untreated cells.</p>

, 2011 , Dr. Anita Nag of Florida State University

Sensitivity of PR63cc to the combinatory treatment with asunaprevir and daclatasvir. Huh7.5.1 cells infected with PR63cc or JFH1 at an MOI of 0.05 for 3 days were treated with either asunaprevir, daclatasvir or in combination for another 3 days. 40 nM asunaprevir and 0.05 nM daclatasvir, approximately the EC50 concentration of the each inhibitor for JFH1, were used. The antiviral efficiency of each compound was evaluated by quantifying the intracellular HCV RNA by RT-qPCR. Data were expressed as the percentage of mock treatment control. The error bars were calculated from two independent experiments. ns, P > 0.05. *, P < 0.05.

Daten von [ , , Antiviral Res, 2017, 139:18-24 ]

Sellecks Daclatasvir (BMS-790052) Wurde zitiert von 58 Publikationen

Rapid hepatitis C virus replication machinery removal after antiviral treatment with DAA monitored by multimodal imaging [ Structure, 2025, S0969-2126(25)00193-5] PubMed: 40553718
Hepatitis C virus-induced differential transcriptional traits in host cells after persistent infection elimination by direct-acting antivirals in cell culture [ J Med Virol, 2024, 96(7):e29787] PubMed: 38988177
Antiviral drugs prolong survival in murine recessive dystrophic epidermolysis bullosa [ EMBO Mol Med, 2024, 16(4):870-884] PubMed: 38462666
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Unraveling the dynamics of hepatitis C virus adaptive mutations and their impact on antiviral responses in primary human hepatocytes [ J Virol, 2024, e0192123.] PubMed: 38319104
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
Hepatitis C virus cell culture adaptive mutations enhance cell culture propagation by multiple mechanisms but boost antiviral responses in primary human hepatocytes [ bioRxiv, 2023, 2023.11.22.568224] PubMed: 38045248
Combination of antiviral drugs inhibits SARS-CoV-2 polymerase and exonuclease and demonstrates COVID-19 therapeutic potential in viral cell culture [ Commun Biol, 2022, 5(1):154] PubMed: 35194144
Going Viral: An Investigation into the Chameleonic Behaviour of Antiviral Compounds [ Chemistry, 2022, e202202798.] PubMed: 36286339
Correlation of hepatitis C virus-mediated endoplasmic reticulum stress with autophagic flux impairment and hepatocarcinogenesis [ Med Mol Morphol, 2021, 10.1007/s00795-020-00271-5] PubMed: 33386512

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