SKI-606 (Bosutinib)

Bosutinib ist selektiv für Src gegenüber Nicht-Src-Familienkinasen mit einer IC50 von 1,2 nM und hemmt potent die Src-abhängige Zellproliferation mit einer IC50 von 100 nM. [1] Diese Verbindung hemmt signifikant die Proliferation von Bcr-Abl-positiven Leukämiezelllinien KU812, K562 und MEG-01, aber nicht Molt-4, HL-60, Ramos und andere Leukämiezelllinien, mit einer IC50 von 5 nM, 20 nM bzw. 20 nM, potenter als STI-571. Ähnlich wie STI-571 zeigt es antiproliferative Aktivität gegen die Abl-MLV-transformierten Fibroblasten mit einer IC50 von 90 nM. Diese Chemikalie ablatiert die Tyrosinphosphorylierung von Bcr-Abl und STAT5 in CML-Zellen und von v-Abl, exprimiert in Fibroblasten, bei einer Konzentration von ~50 nM, 10-25 nM bzw. 200 nM, was zur Bcr-Abl-Downstream-Signalhemmung der Lyn/Hck-Phosphorylierung führt. [2] Obwohl es nicht in der Lage ist, die Proliferation und das Überleben von Brustkrebszellen zu hemmen, verringert es signifikant die Motilität und Invasion von Brustkrebszellen mit einer IC50 von ~250 nM, verbunden mit einer Zunahme der Zell-Zell-Adhäsion und Membranlokalisation von β-Catenin. [3]

Bosutinib (60 mg/kg/Tag) ist wirksam gegen Src-transformierte Fibroblasten-Xenografts und HT29-Xenografts in Nacktmäusen mit T/C von 18 % bzw. 30 %. [1] Die orale Verabreichung dieser Verbindung über 5 Tage unterdrückt das K562-Tumorwachstum bei Mäusen dosisabhängig, wobei die großen Tumoren bei einer Dosis von 100 mg/kg eliminiert und bei 150 mg/kg tumorfrei waren, ohne offensichtliche Toxizität. [2] Da diese Chemikalie bei 50 mg/kg zweimal täglich gegen Colo205-Xenografts in Nacktmäusen inaktiv ist, ist eine Dosis von 75 mg/kg zweimal täglich gegen Colo205-Xenografts erforderlich, und eine Erhöhung der Dosis dieser Verbindung hat keinen zusätzlichen Nutzen, im Gegensatz zur signifikanten dosisabhängigen Wirksamkeit gegen HT29-Xenografts. [4]

• Die Src- und Abl-Kinase-Assays

  Die Src-Kinase-Aktivität wird in einem ELISA-Format gemessen. Src (3 Einheiten/Reaktion), Reaktionspuffer (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 0,1 mM EGTA, 0,5 mM Na₃VO₄) und cdc2-Substratpeptid werden zu verschiedenen Konzentrationen von Bosutinib gegeben und 10 Minuten bei 30 °C inkubiert. Die Reaktion wird durch die Zugabe von ATP zu einer Endkonzentration von 100 μM gestartet, 1 Stunde bei 30 °C inkubiert und durch Zugabe von EDTA gestoppt. Die Anweisungen des Herstellers für die nachfolgenden Schritte werden befolgt. Der Abl-Kinase-Assay wird in einem DELFIA-Festphasen-Europium-basierten Detektionsassay-Format durchgeführt. Biotinyliertes Peptid (2 μM) wird für 1,5 Stunden in 1 mg/mL Ovalbumin in PBS an Streptavidin-beschichtete Mikrotitrationsplatten gebunden. Die Platten werden 1 Stunde lang mit PBS/0,1% Tween 80 gewaschen, gefolgt von einer PBS-Wäsche. Die Kinase-Reaktion wird 1 Stunde lang bei 30°C inkubiert. Abl-Kinase (10 Einheiten) wird mit 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 80 μM EGTA, 100 μM ATP, 0,5 mM Na₃VO₄, 1% DMSO, 1 mM HEPES (pH 7,0), 200 μg/mL Ovalbumin und verschiedenen Konzentrationen dieser Verbindung gemischt. Die Reaktion wird mit EDTA in einer Endkonzentration von 50 mM gestoppt. Die Reaktion wird mit einem Eu-markierten Phosphotyrosin-Antikörper und einer DELFIA-Enhancement-Lösung überwacht.

• Zelllinien

  Abl-MLV, Rat 2, KU812, K562, and MEG-01 cells

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of Bosutinib for 72 hours. Anchorage-independent proliferation of Abl-MLV-transformed fibroblasts is measured in 96-well ultra-low binding plates treated with Sigmacote to block residual cell attachment. Cell proliferation is measured with MTS or Cell-Glo. For the determination of cell cycle or cell death, cells are prepared for FACS analysis in the CycleTest Plus DNA reagent kit and analyzed on a fluorescence-activated cell sorter flow cytometer.

• Tiermodelle

  Nude female mice injected with K562 cells

• Dosierungen

  ~150 mg/kg/day

• Verabreichung

  Oral gavage