In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
Tosedostat (CHR2797) ist ein Aminopeptidase-Inhibitor für LAP, PuSA und Aminopeptidase N mit einer IC50 von 100 nM, 150 nM bzw. 220 nM und hemmt weder PILSAP, MetAP-2, LTA4 Hydrolase noch MetAP-2 effektiv. Phase 2.
Ziele
LAP
PuSA
Aminopeptidase N
100 nM
150 nM
220 nM
In vitro
CHR-2797 hat nahezu keine Wirkung auf die Aktivität von Aminopeptidase B, PILSAP, LTA4 Hydrolase und MetAP-2 mit IC50-Werten von >1 uM, >5 uM, >10 uM bzw. >30 uM. CHR-2797 wird in Zellen in ein pharmakologisch aktives Säureprodukt (CHR-79888) umgewandelt, das eine signifikante hemmende Aktivität gegenüber LTA4 Hydrolase mit einer IC50 von 8 nM zeigt. CHR-2797 zeigt ausgeprägte antiproliferative Effekte gegen eine Reihe von Krebszelllinien wie U-937, HL-60, KG-1 und GDM-1 mit IC50-Werten von 10 nM, 30 nM, 15 nM bzw. 15 nM, ist jedoch inaktiv gegen HuT 78 und Jurkat E6-1 mit IC50-Werten von >10 uM. Es gibt keine offensichtliche Korrelation zwischen der Empfindlichkeit gegenüber CHR-2797 und dem Mutationsstatus von p53, PTEN oder K-Ras in Zellen. CHR-2797 zeigt eine Selektivität für transformierte Zellen (MrC5-SV2 oder K-ras NRK) gegenüber nicht-transformierten Zellen (MrC5 oder NRK). Die Behandlung mit CHR-2797 (6 μM) führt zur Hochregulierung von Genen, die am Aminosäuretransport und an Stoffwechselwegen beteiligt sind, zur Phosphorylierung des eukaryotischen Initiationsfaktors 2α, zur Hemmung der Phosphorylierung von mTOR-Substraten und zu einer reduzierten Proteinsynthese in HL-60-Zellen.
In vivo
Die Verabreichung von CHR-2797 (~100 mg/kg) verringert in vivo das Tumorvolumen im Vergleich zu Kontrollen dosisabhängig im Ratten-HOSP.1-Lungenkolonisierungsmodell, im Ratten-HSN LV10-Chondrosarkom-Leberkolonisierungsmodell, im menschlichen MDA-MB-435-Brustkrebs-Spontanmetastasenmodell und im menschlichen MDA-MB-468-Zell-Xenograftmodell.
Die LAP-Aktivität wird durch Messung der Hydrolyse des Tripeptids LGG bestimmt, die durch das Derivatisierungsreagenz OPA in Gegenwart von β-Mercaptoethanol nachgewiesen wird. Der Assay wird in 96-Well-Assayplatten durchgeführt. Die Wells enthalten verdünntes CHR-2797 (5 μL), 10 μg/mL LAP (5 μL) und 40 μL 0,5 mM LGG. Die Platte wird kurz geschüttelt und 90 Minuten bei 37 °C inkubiert. Die Reaktion wird durch Zugabe von 200 μL OPA/β-Mercaptoethanol pro Well beendet. Die Platte wird mit dem Victor Wallac3-Plattenlesegerät bei einer Anregung von 355 nm und einer Emission von 460 nm abgelesen. Die PuSA-Aktivität wird unter Verwendung des fluorogenen Substrats Ala-AMC bestimmt. Die Inkubationsmischung enthält verdünntes CHR-2797 (20 μL), Substrat (125 μM Ala-AMC in 0,125 M Tris-HCl-Puffer, pH 7,5; 40 μL) und Enzym (40 μL). Nach einer Inkubation von 2 Stunden bei 37 °C wird die Reaktion durch Zugabe von 100 μL 3 % (v/v) Essigsäure gestoppt. Die Fluoreszenz wird mit einem SLT Fluostar Fluorimeter gemessen. Aminopeptidase N wird unter Verwendung des fluorogenen Substrats Ala-AMC getestet. Die Inkubationsmischung enthält verdünntes CHR-2797 (20 μL), Substrat (40 μL; Endkonzentration, 60 μM) und Enzym (40 μL, 1:8000 Verdünnung) und wird 60 Minuten bei 37 °C inkubiert, bevor 100 μL 3 % (v/v) Essigsäure zur Beendigung der Reaktion hinzugefügt werden. Die Fluoreszenz wird mit einem SLT Fluostar Fluorimeter gemessen.
Cells are exposed to different concentrations of CHR-2797 for 72 hours. During the final 4 hours of this incubation, cells are pulsed with 0.4 μCi/well of [3H]thymidine (specific activity, 5 mCi/mmol), harvested onto GF/C glass fiber filter mats using a Tomtec harvester, and counted on a 1450 MicroBeta scintillation counter to determine the amount of [3H]thymidine incorporated into cellular DNA. Inhibition of the proliferation of human cancer cell lines is measured by [3H]thymidine incorporation.
Female rats (CBH/cbi) injected i.v. with HOSP.1P cells, male (CBH/cbi) rats injected with HSN LV10 cells, and nude mice (MF1 (nu/nu) inoculated with MDA-MB 435 cells or MDA-MB-468 cells
Dosierungen
~100 mg/kg
Verabreichung
Dosed daily p.o.
Referenzen
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18701491/
Sellecks Tosedostat (CHR2797) Wurde zitiert von 3 Publikationen
Predicting effective pro-apoptotic anti-leukaemic drug combinations using co-operative dynamic BH3 profiling
[ PLoS One, 2018, 13(1):e0190682]
Response of Single Leukemic Cells to Peptidase Inhibitor Therapy Across Time and Dose Using a Microfluidic Device
[Kovarik ML ,et al. Integr Biol, 2014, 6(2):164-74]
Microfluidic chemical cytometry of peptide degradation in single drug-treated acute myeloid leukemia cells.
[Kovarik ML, et al. Anal Chem, 2013, 85(10):4991-7]
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