Lexibulin (CYT997)

Katalog-Nr.S2195 Charge:S219502

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Technische Daten

Formel

C24H30N6O2
Molekulargewicht 434.53 CAS-Nr. 917111-44-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 86 mg/mL (197.91 mM)
Ethanol 86 mg/mL (197.91 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 4.3mg/ml (9.90mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 86 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.61mg/ml (1.40mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 12.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Lexibulin (CYT997, SRI-32007) ist ein potenter microtubule-Polymerisationsinhibitor mit einer IC50 von 10-100 nM in Krebszelllinien. Diese Verbindung befindet sich in Phase 2.
Ziele
Microtubules (cancer cell lines)
10 nM-100 nM
In vitro Die Behandlung mit Lexibulin (CYT997) (1 μM) über 24 Stunden in A549-Zellen induziert eine schnelle Reorganisation der Mikrotubuli, einschließlich der Zerstörung des bestehenden Mikrotubuli-Netzwerks und der Akkumulation von Tubulin in Plaques im Zytoplasma einiger Zellen, was zu signifikanten Veränderungen der Zellmorphologie führt, einschließlich des Verlusts der Adhäsion und der Zellrundung. Es zeigt eine starke zytotoxische Aktivität gegen eine Reihe von 16 Krebszellen mit IC50-Werten zwischen 9 nM für HepG2 und 101 nM für KHOS/NP. Insbesondere zeigt diese Verbindung eine starke Aktivität gegen HCT15-Zellen, die bekanntermaßen den Multidrug-Resistenzmechanismus Pgp (MDR+) besitzen, mit einer IC50 von 52 nM. Durch die Hemmung der Mikrotubuli-Polymerisation blockiert es den Zellzyklus an der G2-M-Grenze und induziert eine Zunahme von phosphoryliertem Bcl-2 und eine erhöhte Expression von Cyclin B1 sowie die Aktivierung von Caspase-3 und die Generierung von Poly(ADP-Ribose)-Polymerase. Seine Behandlung führt zu einem schnellen und reversiblen Anstieg der Permeabilität von HUVEC-Monolayern mit einer IC50 von ~80 nM nach 1 Stunde Exposition. Im Einklang mit der Störung des zellulären Tubulins hemmt es potent die Proliferation, induziert Zellzyklusarrest und vor allem Apoptose sowohl von menschlichen Myelomzelllinien (HMCLs) als auch von primären MM-Zellen.
In vivo Die Halbwertszeit von Lexibulin (CYT997) bei oraler Verabreichung (2,5 Stunden) an Ratten ist etwas länger als bei intravenöser Verabreichung (1,5 Stunden), wobei die absolute orale Bioverfügbarkeit zwischen 50 % und 70 % liegt. Die orale Verabreichung dieser Verbindung induziert eine dosisabhängige Hemmung des Tumorwachstums von PC3-Xenografts bei Mäusen, potenter im Vergleich zu Paclitaxel. Es ist auch wirksam in einem orthotopen syngenen Modell unter Verwendung der Maus-Brustkrebszellen 4T1, die teilweise refraktär gegenüber Paclitaxel-Behandlung sind. Eine Einzeldosis von CYT997 (7,5 mg/kg, i.p.) reduziert den Tumordurchblutung in Lebermetastasen innerhalb von 6 Stunden signifikant, in ähnlichem Ausmaß wie die positive Kontrolle CA4P in einer Dosis von 100 mg/kg. Die Behandlung mit dieser Verbindung (15 mg/kg/Tag) verlängert die Überlebenszeit in einem murinen Modell der aggressiven systemischen Myelomatose signifikant.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Trübidimetrischer Assay zur Tubulin-Polymerisation

    Die Wirkung von Lexibulin (CYT997) auf die Mikrotubuli-Polymerisation wird mittels eines konventionellen turbidimetrischen Assays mit bovinem neuronalem Tubulin bestimmt, bei dem die Mikrotubuli-Assemblierung durch eine Zunahme der Absorption bei 340 nm überwacht wird. Steigende Konzentrationen dieser Verbindung werden zu 100 μL Tubulin/GTP/Glycerin gegeben. Turbidimetrische Assays der Mikrotubuli-Assemblierung werden durchgeführt, indem bovines Mikrotubuli-Protein in Küvetten bei 37 °C in einem thermostatisch kontrollierten Spektralphotometer inkubiert wird, wobei die Veränderung der Absorption bei 340 nm über die Zeit in PEM-Puffer [80 nM PIPES (pH 6.9), 2 mM MgCl2, 0.5 mM EGTA und 5% Glycerin] gemessen wird.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    DU145, A549, Ramos, KHOS/NP, A375, HCT-15, HT1376, BT-20, A431, PA-1, U937, HepG2, TF-1, Baf3/TelJAK2, PC3, and K562

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

  • Inkubationszeit

    ~72 hours

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Lexibulin (CYT997) for ~72 hours. Cell proliferation is assessed with either the Alamar blue or MTT assays. For MTT assays, 5 mg/mL of MTT is added to all wells, plates are incubated for 6 hours at 37 °C, and then lysis buffer is added (10% SDS in 0.01 N HCl) and absorbance is measured at 620 nm in a BMG Technologies Lumistar or Polarstar plate reader. For Alamar blue assays, Alamar blue (10 μL/well) is added to each well and the plates are incubated at 37 °C for 4 hours. The fluorescence is then measured using a fluorescence plate reader with an excitation filter at 544 nm and an emission filter at 590 nm. For cell cycle analysis, cells are fixed and permeabilized with 70% ethanol in PBS and incubated at 4 °C overnight. RNase-treated samples (10 μg RNase/mL for 20 minutes at 37 °C) are stained with propidium iodide (5 μg/mL) at 4 °C for a minimum of 10 minutes. Cell cycle variables are determined by fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis using a Beckman-Coulter Quanta SC MPL system and analyzed using CXP Software. For apoptosis analysis, cells are detached and collected. Annexin staining is done using the Vybrant Apoptosis Assay Kit. Cells are stored on ice and analyzed on a Beckman Coulter Quanta MPL within 1 hour of preparation. Annexin V–positive cells are determined using two-channel analysis.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Male nude mice inoculated s.c. with PC3 cells, and female BALB/c mice inoculated with 4T1 cells

  • Dosierungen

    ~30 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Oral gavage thrice a day

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19887548/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19907921/

Kundenproduktvalidierung

<p>CYT997 inhibits cellular proliferation in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. Cell viability was measured by a 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay in 96-well plates in the presence of increasing concentrations of CYT997 for 24 h.The results represent the mean ?SD of four replicates.</p>

Daten von [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>CYT997 induces apoptosis in acute myeloid leukemia (AML) cell lines. HL-60 cells were treated with CYT997 (0, 50, 100, and 200 nM) for 24 h, resuspended in propidium iodide (PI)-containing hypotonic buffer, and then the percentage of apoptotic cells was analyzed by flow cytometry.</p>

Daten von [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Activation of caspases by CYT997. (A) Immunoblotting analysis for caspase-9, -8 and -3 and poly ADP-ribose polymerase (PARP), was performed in lysates of HL-60 cells treated with CYT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. (B) Annexin V-propidium iodide (PI) staining was performed to quantify phospha- tidylserine externalization in HL-60 cells treated with CYT997 (200 nM) or untreated for 24 h, in the presence or absence of the caspase-8 inhibitor. * P<0.05.</p>

Daten von [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

<p>Effects of CYT997 on the cell cycle. HL-60 cells were treated with CT997 (0, 50, 100 or 200 nM) for 24 h. The cell cycle was analyzed using propidium iodide (PI) staining followed by flow cytometry analysis.</p>

Daten von [ Exp Ther Med , 2013 , 6(2), 299-304 ]

Sellecks Lexibulin (CYT997) Wurde zitiert von 8 Publikationen

A modular master regulator landscape controls cancer transcriptional identity [ Cell, 2021, 184(2):334-351.e20] PubMed: 33434495
HBV Core Promoter Inhibition by Tubulin Polymerization Inhibitor (SRI-32007) [ Adv Virol, 2020, 2020:8844061] PubMed: 33110426
CYT997(Lexibulin) induces apoptosis and autophagy through the activation of mutually reinforced ER stress and ROS in osteosarcoma [ J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1):44] PubMed: 30704503
Intracellular reduction in ATP levels contributes to CYT997-induced suppression of metastasis of head and neck squamous carcinoma. [ J Cell Mol Med, 2019, 23(2):1174-1182] PubMed: 30450674
Survival of midbrain dopamine neurons depends on the Bcl2 factor Mcl1 [ Cell Death Discov, 2018, 4:107] PubMed: 30479840
Augmentation of the anticancer activity of CYT997 in human prostate cancer by inhibiting Src activity. [ J Hematol Oncol, 2017, 10(1):118] PubMed: 28606127
Structures of a diverse set of colchicine binding site inhibitors in complex with tubulin provide a rationale for drug discovery. [ FEBS J, 2016, 283(1):102-11] PubMed: 26462166
The microtubule depolymerizing agent CYT997 effectively kills acute myeloid leukemia cells via activation of caspases and inhibition of PI3K/Akt/mTOR pathway proteins. [XIAOHUI CHEN, et al. Exp Ther Med, 2013, 6(2):299-304] PubMed: 24137178

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