Chelerythrine Chloride (NSC 646662)

Chelerythrine Chloride (NSC 646662) interagiert mit der katalytischen Domäne von PKC, ist ein kompetitiver Inhibitor bezüglich des Phosphatakzeptors (Histon IIIS) mit einem Ki-Wert von 0,7 μM und ein nicht-kompetitiver Inhibitor bezüglich ATP. Es zeigt potente zytotoxische Wirkungen gegen L-1210-Zellen mit einer IC50 von 0,53 μM. Diese Verbindung verändert keine Aktivität von PKA, TPK und Ca/CM-PK, und ihre hemmende Wirkung auf die PKC-Aktivität variiert nicht zwischen den verschiedenen Substraten, einschließlich GS, MLC, MBP und Fibrinogen. [1] Es hemmt die PKC-Aktivität in Rohextrakten von SQ-20B-Zellen dosisabhängig. Chelerythrine verringert die Zellviabilität, bestimmt durch den MTT-Assay, dosisabhängig in SCC35-, JSQ3-, SQ20B- und SCC61-Zellen. [2] Bei 5 μM unterdrückt es die VEGF-induzierte Expression von ICAM-1, VCAM-1 und E-Selektin in HUVECs. Es unterdrückt auch die VEGF-induzierte NF-κB-Aktivität in HUVECs bei gleicher Konzentration und unterdrückt sowohl die basale als auch die VEGF-induzierte Leukozytenadhäsion in HUVECs. [3] Bei Konzentrationen von 6 mM-30 mM induziert es schnell Pyknose, Schrumpfung und den anschließenden Zelltod in Herzmuskelzellen. Chelerythrin (30 μM)-induzierter Myozyten-Tod wird von nukleärer Fragmentierung und Aktivierung von Caspase-3 und -9 in der Primärkultur neonataler Rattenherzmuskelzellen begleitet. Bei 10 μM führt es zur Freisetzung von Cytochrom c aus Mitochondrien, was darauf hindeutet, dass ROS die Chelerythrin-induzierte Cytochrom c-Freisetzung in Herzmuskelzellen vermittelt. [4] Es verdrängt das fluoreszent markierte BH3-Domänenpeptid von einem rekombinanten GST-BcLXL-Fusionsprotein mit einer IC50 von 1,5 μM. Bei 2,5 μM und 5 μM für 16 Stunden induziert es eine erhebliche Abnahme des mitochondrialen Potentials, angezeigt durch einen Anstieg der JC-1-Grünfluoreszenz in menschlichen Neuroblastom-SH-SY5Y-Zellen. Bei 5 μM induziert es auch das Auftreten von Sub-G1-DNA, was auf Apoptose in SH-SY5Y-Zellen hinweist. Bei 10 μM induziert es eine Veränderung des mitochondrialen Potentials und die CytC-Freisetzung aus den Mitochondrien in SH-SY5Y-Zellen. [5]

Chelerythrine Chloride (NSC 646662) (5 mg/kg i.p.) führt zu einer Verzögerung des Tumorwachstums bei Mäusen mit SQ-20B-Xenografts. [2] Diese Verbindung (5 mg/kg) führt zu einer signifikanten Zunahme TUNEL-positiver Kerne im Myokard sowie gespaltener Formen von Caspase-3 und -9 bei erwachsenen Ratten. [4]

• Assay für Proteinkinase C

  Die gereinigte Proteinkinase C wird aus Rattenhirn präpariert. Kurz gesagt, das Inkubationsgemisch (200 μL) enthält 20 mM Tris/HCl-Puffer (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 200 μg/mL Histone, Mizellen, hergestellt mit 700 μM Phosphatidylserin und 180 μM 1,2-Diolefin in 0,3% Triton X100, 0,2 mM CaCl₂, 100 μM ATP, [γ-³²P ]-ATP (10⁵ dpm), Chelerythrine Chloride (NSC 646662) (in Dimethylsulfoxid gelöst) und das Enzym (0,5 μg Protein). Nach Inkubation bei 30℃ für 3 Minuten wird die Reaktion durch Zugabe von 3 mL 20%iger Trichloressigsäure beendet. Säurepräzipitierbare Materialien werden auf Whatman GFE-Filtern gesammelt und ausgiebig mit eiskalter 20%iger Trichloressigsäure gewaschen. Die Radioaktivität auf den Filtern wird mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler gemessen. Die Proteinkinase C-Aktivität wird für unspezifische Aktivität korrigiert, indem der Assay in Abwesenheit von Mizellen und CaCl₂ durchgeführt wird.

• Zelllinien

  L-1210 cells

• Konzentrationen

  ~10 μM

• Inkubationszeit

  2 days

• Methode

  The lymphocytic mouse leukemia L1210 cells are plated sparsely at 1×10⁴ cells per well in 24-well cluster plates in RPMI 1640 medium containing 10% foetal calf serum, 4 mM glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 pg/mL streptomycin sulphate and Chelerythrine Chloride (NSC 646662) to be tested (solubilized in dimethylsulphoxyde ). After a 2 day incubation period at 37 ℃ in a humidified atmosphere (5% CO₂ in air), growth is monitored by counting cell numbers in a coulter-counter. IC50 values are calculated on the basis of the linear regression lines established for this compound.

• Tiermodelle

  mice bearing SQ-20B xenografts

• Dosierungen

  5 mg/kg

• Verabreichung

  Intraperitoneal injection