Cyclopamine (11-Deoxojervine)

Katalog-Nr.S1146 Charge:S114609

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Technische Daten

Formel

C27H41NO2
Molekulargewicht 411.62 CAS-Nr. 4449-51-8
Löslichkeit (25°C)* In vitro Ethanol 4 mg/mL (9.71 mM)
DMSO Insoluble
Water Insoluble
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Cyclopamine (11-Deoxojervine) ist ein spezifischer Hedgehog (Hh)-Signalweg-Antagonist von Smoothened (Smo) mit einem IC50 von 46 nM in TM3Hh12-Zellen.
Ziele
Smoothened
(TM3Hh12 cells)
46 nM
In vitro Cyclopamine hemmt den Hedgehog-Signalweg mit einem IC50 von 46 nM und blockiert die Aktivität des menschlichen Smo-Rezeptors, der in CHO-K1-Zellen im [3H]Hh-Ag-Bindungsassay exprimiert wird, mit einem IC50 von 280 nM. Diese Verbindung hemmt die Aktivität des Hedgehog-Signalwegs dosisabhängig in von Darm abgeleiteten Tumorzelllinien, die Patched (PTCH)-mRNA exprimieren, und induziert eine Wachstumshemmung dieser Tumorzelllinien um 75-95% bei einer Konzentration von 3 μM, ist jedoch unwirksam gegenüber Kolontumorzellen ohne PTCH-mRNA-Expression, was darauf hindeutet, dass die Wirkungen dieser chemischen Behandlung eher mit dem Hedgehog-Signalweg zusammenhängen als generell zytotoxisch sind. Durch die Blockierung der Hedgehog-Signalübertragung durch direkte Interaktion mit Smo hemmt es (10 μM) die Proliferation von SMOhigh Cyclopamine-responsiven Zelllinien L3.6sl und Panc 05.04 um 75-80% und erhöht die Apoptose um das 2,5- bis 3,5-fache, ohne die BxPC3-SMOlow-Zelllinie zu beeinflussen. Diese Behandlung verringert signifikant die Snail-mRNA und erhöht die E-Cadherin-Transkripte in der E3LZ10.7-Zelllinie. Unabhängig von der Hemmung des Zellwachstums hemmt es signifikant den invasiven Phänotyp von Hedgehog-abhängigen L3.6pl-Zellen, was zu einer >500-fachen Reduzierung der Anzahl der transmigrierenden Zellen führt, aber nicht den der Hedgehog-unabhängigen Zelllinie Panc-1.
In vivo Die Verabreichung von Cyclopamine in einer Dosis von 50 mg/kg/Tag über 22 Tage beseitigt die HUCCT1-Xenotransplantate bei Mäusen ohne offensichtliche Nebenwirkungen. Diese Verbindungstherapie in einer Dosis von 1,2 mg über 7 Tage induziert eine signifikante Apoptose von Tumorzellen und verringert die Tumormasse um 50-60% in von Panc 05.04- und L3.6sl-abgeleiteten Tumoren, jedoch nicht in den BxPC3-SMOlow-Tumoren. [3] Die alleinige Verabreichung dieser Chemikalie hemmt die Tumormetastasierung in Xenotransplantaten von E3LZ10.7 und L3.6pl erheblich und hebt die Metastasierung in Kombination mit Gemcitabin vollständig auf.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Hedgehog-Zell-Assay

    Dieser Assay misst das Endstadium des Hh-Signalwegs, d.h. die transkriptionelle Modulation von Gli, unter Verwendung von Luciferase als Ablesung (Gli-Luc-Assay). Cyclopamine wird für den Assay durch serielle Verdünnung in DMSO vorbereitet und dann zu leeren Assayplatten gegeben. TM3Hh12-Zellen (TM3-Zellen, die das Hh-responsive Reportergenkonstrukt pTA-8xGli-Luc enthalten) werden in F12 Ham's/DMEM (1:1) mit 5% FBS und 15 mM Hepes pH 7,3 resuspendiert, zu den Assayplatten gegeben und etwa 30 Minuten lang bei 37 °C in 5% CO2 mit dieser Verbindung inkubiert. Anschließend wird 1 nM Hh-Ag 1.5 zu den Assayplatten gegeben und bei 37 °C in Gegenwart von 5% CO2 inkubiert. Nach 48 Stunden wird entweder Bright-Glo oder MTS-Reagenz zu den Assayplatten gegeben und die Lumineszenz oder Absorption bei 492 nm bestimmt. Der IC50-Wert, definiert als der Wendepunkt der logistischen Kurve, wird durch nicht-lineare Regression der Gli-gesteuerten Luciferase-Lumineszenz oder des Absorptionssignals aus dem MTS-Assay gegen log10 (Konzentration) dieser Chemikalie unter Verwendung des statistischen Softwarepakets R bestimmt.
Zell-Assay:[2]
  • Zelllinien

    SEG1, OE33, KYAE, KYSE180, SNU1, AGS, SNU16, NCI-N-87, HUCCT1, PANC1, PL5, PL6, BXPC3, HS766T, KYSE150, GBD1, DLD1, and HCT116

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentration 3 μM

  • Inkubationszeit

    4 days

  • Methode

    Cells are exposed to Cyclopamine in 96-well plates. Cell viability is measured by MTS (soluble tetrazolium salt) assay. Viable cell mass is determined by optical density measurements at 490 nm (OD490) at 2 and 4 days using the CellTiter96 colorimetric assay. Relative growth is calculated as OD (day 4)﹣OD (day 2)/OD (day 2).
Tierstudie:[2]
  • Tiermodelle

    Athymic (nude) mice inoculated subcutaneously with HUCCT1 cells

  • Dosierungen

    50 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Subcutaneous injection

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19091559/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520411/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14520413/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17332349/

Kundenproduktvalidierung

<p>(A)[3H]thymidine incorporation assay of B16F10 melanoma cells treated with DMSO or cyclopamine after incubation with SA-CM from WT and Cav1KO dermal fibroblasts. Representative phase-contrast images of B16F10 cells treated with SA-CM from WT and Cav1KO fibroblasts with cyclopamine are shown on the right. Similar experiments (B) were done with A-375 cells incubated with SA-CM from hTBJ1-shCtrl and hTBJ1-shCAV1 cells.</p>

Daten von [ Cancer Res , 2012 , 72, 2262-74 ]

<p>(A) The effects of cyclopamine (10 μM) in pancreatic cancer cell invasion. The number of migrated cells was quantified by counting the number of cells from 10 random fields at 200 magnification. (B) The effects of cyclopamine on the expression of EMT-related molecules E-cadherin and vimentin, and Hh pathway-related proteins SMO and Gli-1 were analyzed by Western blotting following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor cyclopamine. Normal culture was used as a negative control. (C) The EMT-related molecules Ecadherin and vimentin mRNA levels, and Hh pathway-related genes at mRNA level were analyzed by real-time RT-PCR following treatment of MiaPaCa-2 and Panc-1 with SDF-1 for 48 h in the presence or absence of the SMO inhibitor Cyclopamine. Normal culture was used as a negative control.</p>

Daten von [ Cancer Lett , 2012 , 322, 169-176 ]

<p>(A) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) for 72 hours promoted expansion of CD34+ cells and CD34- cells, cyclopamine (10 μM) for 72 hours induced apoptosis of CD34+ cells and CD34- cells, as measured by 3-(3,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide (MTT) assay, n =4, bars, standard deviation. *Statistically significant compared with CD34+ cells. (B) Exogenous Shh peptide (500 ng/mL) promoted cell expansion after 48 hours and cyclopamine (10 μM) induced cell apoptosis within 24 hours measured by MTT assay (n=6).</p>

Daten von [ Exp Hematol , 2012 , 40, 418-27 ]

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of Cyclopamine by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 mM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

Sellecks Cyclopamine (11-Deoxojervine) Wurde zitiert von 148 Publikationen

The O-glycosyltransferase C1GALT1 promotes EWSR1::FLI1 expression and is a therapeutic target for Ewing sarcoma [ Nat Commun, 2025, 16(1):1267] PubMed: 39894896
PlexinD1 is a driver and a therapeutic target in advanced prostate cancer [ EMBO Mol Med, 2025, 17(2):336-364] PubMed: 39748059
PPARG contributes to urothelial integrity in the murine ureter by activating the expression of Shh and superficial cell-specific genes [ Development, 2025, 152(8)dev204324] PubMed: 40167323
Interplay of SHH, WNT and BMP4 signaling regulates the development of the lamina propria in the murine ureter [ Development, 2025, 152(3)DEV204214] PubMed: 39817691
Hedgehog inhibitors exert anti-proliferation effects and synergistically interact with trastuzumab in HER2-positive gastric cancer models [ Acta Oncol, 2025, 64:715-728] PubMed: 40426308
Inhibition of PI3K and Hedgehog Signaling Pathway Inhibits Hypoxia-Induced Vasculogenic Mimicry Formation in Ovarian Cancer Stem Cells [ Balk Med J, 2025, 42(5):440-451] PubMed: 40888349
SHH Pathway Inhibition and Astrocyte Co-culture Induce Distinct Responses in Glioblastoma and Cancer Stem Cells [ Res Sq, 2025, rs.3.rs-7214243] PubMed: 40894044
Proximity based proteomics reveals Git1 as a regulator of Smoothened signaling [ bioRxiv, 2025, 2025.01.06.631593] PubMed: 39829937
Foxo3-mediated physiological cell competition ensures robust tissue patterning throughout vertebrate development [ Nat Commun, 2024, 15(1):10662] PubMed: 39690179
Phosphorylation of human glioma-associated oncogene 1 on Ser937 regulates Sonic Hedgehog signaling in medulloblastoma [ Nat Commun, 2024, 15(1):987] PubMed: 38307877

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