Danoprevir

Katalog-Nr.S1183 Charge:S118301

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Technische Daten

Formel

C35H46FN5O9S
Molekulargewicht 731.83 CAS-Nr. 850876-88-9
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 144 mg/mL (196.76 mM)
Ethanol 144 mg/mL (196.76 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 3.600mg/ml (4.92mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 72 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 1.210mg/ml (1.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 24.2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung Danoprevir ist ein peptidomimetischer Inhibitor der NS3/4A-Protease des Hepatitis-C-Virus (HCV) mit einer IC50 von 0,2-3,5 nM. Die Hemmwirkung für HCV-Genotypen 1A/1B/4/5/6 ist etwa 10-mal höher als für 2B/3A. Phase 2.
Ziele
HCV NS3/4A protease
0.2 nM-3.5 nM
In vitro

Danoprevir (0,29 nM) hemmt die NS3/4A-Protease des Referenz-Genotyps 1 halbmaximal, aber eine hohe Dosis dieser Verbindung (10 μM) zeigt keine nennenswerte Hemmung in einem Panel von 79 Proteases, Ionenkanälen, Transportern und Zelloberflächenrezeptoren. Es bleibt länger als 5 Stunden nach seiner anfänglichen Assoziation an NS3/4A gebunden und hemmt es. Diese Chemikalie (45 nM) eliminiert ein von Patienten stammendes HCV-Genotyp-1b-Replikon aus hepatozytenabgeleiteten Huh7-Zellen mit einer EC50 von 1,8 nM. In HCV-subgenomischen Replikon-Zelllinien, die die einzelnen Mutationen enthalten, verleihen V36M-, R109K- und V170A-Substitutionen wenig oder keine Resistenz dagegen, aber die R155K-Substitution verleiht eine hohe Resistenz (62-fache Zunahme) gegenüber dieser Verbindung. In Huh7.5-Zellen, die mit chimärem rekombinantem Virus transfiziert wurden, zeigt es antivirale Hemmeffekte gegen HCV-Genotypen 1, 4 und 6 mit IC50-Werten von 2-3 nM, die >100-mal niedriger sind als bei den Genotypen 2/3/5 (280-750 nM).

In vivo

Danoprevir (30 mg/kg), das Ratten oder Affen verabreicht wird, zeigt, dass seine Konzentrationen in der Leber 12 Stunden nach der Dosis die Konzentration dieser Verbindung überschreiten, die erforderlich ist, um Replikon-RNA aus Zellen zu eliminieren.

Merkmale Ein peptidomimetischer Inhibitor der NS3/4A-Protease des Hepatitis-C-Virus (HCV).

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:

[1]
  • Kontinuierlicher Fluoreszenzresonanzenergietransfer (FRET)-Assay

    Der Assay-Puffer enthält 25 μM NS4A-Peptid, 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 15% Vol./Vol., 10 mM Dithiothreitol und 0,5 μM QXL520-markiertes FRET-Substrat {Ac-DE-Dap(QXL520)-EE-Abu-ψ-[COO]-AS-Cys(5-FAMsp)-NH2}. K2040-Enzym (50 pM) wird hinzugefügt, um die Reaktion zu initiieren. Reaktionen werden in schwarzen 96-Well-Platten angesetzt, und Fluoreszenzdaten werden gesammelt. Kontrollreaktionen ohne Inhibitoren und Enzym sind enthalten. Die Anfangsraten werden aus der linearen Phase der Reaktion (bis zu 1 Stunde) berechnet und zur Bestimmung der IC50 verwendet. Die Wiederherstellung der Aktivität aus dem vorgebildeten Danoprevir-NS3/4A-Komplex wird durch Vorinkubation von 10 nM NS3/4A mit einem zweifachen Überschuss dieser Chemikalie in 1× Assay-Puffer für 15 Minuten beurteilt, gefolgt von einer schnellen 200-fachen Verdünnung des vorgebildeten Komplexes in Assay-Puffer, der Substrat enthält. Eine Kontrollreaktion mit den gleichen Endbedingungen ohne Vorinkubation von NS3/4A und Danoprevir wird durch Zugabe von Enzym zu einem ansonsten vollständigen Reaktionsgemisch initiiert. Zusätzliche Kontrollreaktionen enthalten entweder Danoprevir oder NS3 nicht. Der Verlauf der Reaktionen wird über 5 Stunden verfolgt.
Zell-Assay:

[1]
  • Zelllinien

    Huh7 cells harboring HCV replicon

  • Konzentrationen

    5 pM - 100 nM

  • Inkubationszeit

    48 hours

  • Methode

    Serially diluted Danoprevir is added to Huh7 cells harboring the K2040 replicon 1 day after cell plating. For antiviral assays, after a 48-hour incubation, intracellular RNA is extracted, and the level of HCV replicon RNA is quantified by reverse transcription (RT)-PCR assay with the primers (5'-CACTCCCCTGTGAGGAACTACTG-3' and 5'-AGGCTGCACGACACTCATACT-3') and a probe (5'-6-FAM-CTTCACGCAGAAAGCGTCTAGCCATGG-MGBNFQ-3' using an ABI Prism 7900 sequence detection system. Here, FAM is 6-carboxyfluorescin and MGBNFQ is a molecular-groove binding non-fluorescence quencher specific to the HCV 5' untranslated region. Single-tube reactions are performed using the TaqMan Gold RT-PCR kit. Triplicate reactions for the RNA standards and samples are performed in 50 μL with 5 μL intracellular RNA (50 ng). RT is carried out at 48 °C for 30 min followed by 10 min at 95 °C. The PCR is run as follows: 15 seconds at 95 °C and 1 min at 60 °C for 40 cycles. Each RNA concentration is determined in triplicate. The absolute concentration of replicon RNA is calculated based on its signal relative to that of a standard curve generated by known concentrations of an in vitro-transcribed RNA corresponding to a genotype 1b 5' untranslated region. Replicon levels in the presence of this compound are fitted to a four-parameter logistic function to obtain EC50.
Tierstudie:

[1]
  • Tiermodelle

    Sprague-Dawley rats, Cynomolgus monkeys

  • Dosierungen

    30 mg/kg

  • Verabreichung

    Oral gavage

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18824605/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18637752/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21480315/

Kundenproduktvalidierung

Western blot analysis of HCV NS3 protease cleavage of MAVS. The catalytic efficiency of four proteases (H, H-A156T, 41 and 41-A156T) from individuals H and 41 were tested in the absence or presence of an NS3 protease inhibitor (danoprevir). Expression of the HCV NS3 proteases resulted in cleavage of the lambda cI repressor with MAVS cleavage site. Expression of the protease was induced with IPTG for 3 h. The lambda cI repressor with MAVS cleavage site was not cleaved by an NS3 protease that included a substitution in catalytic residue S139A. Similarly, different catalytic efficiencies were observed with different proteases.

Daten von [ Mol Biol Evol , 2014 , 31(6), 1546-53 ]

Suppression of HCV replication by anti-HCV inhibitors. HCV-Feo replicon-containing cells were seeded in 96-well plates at a density of 1 x 10<sub>4</sub> cells/well. Twenty-four hours later, cells were exposed to the indicated concentrations of danoprevir. After a 72-hour treatment with inhibitors, cells were harvested and firefly luciferase activity was measured. Results are the means and SDs of three independent experiments (upper panels). PrestoBlue cell viability reagent (Invitrogen, CA) was used to examine the cytotoxic effect of inhibitors according to the manufacturer

Daten von [ Antimicrob Agents Chemother , 2012 , 56(10), 5365-73 ]

<p>Inhibition of HCV and CHV NS3/4A proteases in the presence of the protease inhibitors (A) 25a or (B) danoprevir. The graph illustrates the relative (%) lambda phage titer after selective growth of lambda in E. coli cells coexpressing the NS3/4A protease constructs and the lambda cI repressor expressing either MAVS or TRIF cleavage sites in the absence or presence of protease inhibitors (20 mM). No significant inhibition was detected with an HCV NS3/4A protease mutant carrying the substitution D168V, which confers resistance to protease inhibitors. Values are the means 6 standard deviations (error bars) of at least three experiments.</p>

Daten von [ PLoS One , 2012 , 7, e42481 ]

<p>Effects of TNFα, etanercept, and danoprevir on HCV infection in HFLC. Cells (n=6 wells/condition) were treated with TNFα (20 ng/ml) ± etanercept (1 μg/ml), danoprevir (2 μM), or media control before and during infection with Jc1G. Secreted luciferase was measured 96 hours after the start of infection. Box-and-whiskers plot; whiskers represent minimum and maximum values. Values of p were calculated by one-way ANOVA. ***, p < 0.001; ****, p < 0.0001</p>

, , Gastroenterology, 2017, 153(2):566-578

Sellecks Danoprevir Wurde zitiert von 22 Publikationen

Targeting eEF1A reprograms translation and uncovers broad-spectrum antivirals against cap or m6A protein synthesis routes [ Nat Commun, 2025, 16(1):1087] PubMed: 39920115
The exon junction complex coordinates the cotranscriptional inclusion of blocks of neighboring exons [ Genes Dev, 2025, 10.1101/gad.353081.125] PubMed: 41102016
Zbtb16 determines the fate plasticity of cardiovascular progenitors through IGF2BP3-mediated mRNA stabilization [ Cell Rep, 2025, 44(8):116127] PubMed: 40779394
Small Molecule Targeting of Atypical p38 Protects Against Viral Infection [ FASEB J, 2025, 39(20):e71096] PubMed: 41082179
Preclinical characterization of a non-peptidomimetic HIV protease inhibitor with improved metabolic stability [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0137323.] PubMed: 38380945
Mechanisms of Action of the Host-Targeting Agent Cyclosporin A and Direct-Acting Antiviral Agents against Hepatitis C Virus [ Viruses, 2023, 15(4)981] PubMed: 37112961
RECOVER identifies synergistic drug combinations in vitro through sequential model optimization [ Cell Rep Methods, 2023, 3(10):100599] PubMed: 37797618
Integrative multiomics and in silico analysis revealed the role of ARHGEF1 and its screened antagonist in mild and severe COVID-19 patients [ J Cell Biochem, 2022, 10.1002/jcb.30213] PubMed: 35037717
Hepatitis C virus drugs that inhibit SARS-CoV-2 papain-like protease synergize with remdesivir to suppress viral replication in cell culture [ Cell Rep, 2021, 35(7):109133] PubMed: 33984267
Characterization of fluorescent probe substrates to develop an efficient high-throughput assay for neonatal hepatic CYP3A7 inhibition screening [ Sci Rep, 2021, 11(1):19443] PubMed: 34593846

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