Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669)

Die Behandlung von HT-1080-Zellen mit Deforolimus induziert eine dosisabhängige Hemmung der Phosphorylierung sowohl von S6 als auch von 4E-BP1 mit einer IC50 von 0,2 nM bzw. 5,6 nM und führt zu einer Verringerung der Zellgröße, einer Zunahme des Anteils der Zellen in der G1-Phase des Zellzyklus und einer Hemmung der Glukoseaufnahme. Deforolimus zeigt eine signifikante antiproliferative Aktivität in einer breiten Palette von Zelllinien mit EC50 von 0,2-2,3 nM. Deforolimus hemmt die VEGF-Produktion potent und selektiv in einer dosisabhängigen Weise. [1] Die Behandlung mit Deforolimus induziert eine signifikante Wachstumshemmung in menschlichen NSCLC-Zelllinien mit IC30-Werten von 2,45-8,83 nM, mit Ausnahme von H157 mit einer IC30 von >20 nM. Die Behandlung mit Deforolimus (2,8-5,9 nM) dephosphoryliert signifikant p70S6K^Thr389 in A549-, H1703- und H157-Zellen, außer in H1666, die möglicherweise eine resistente Variante von mTORC1 exprimiert, und verursacht eine erhöhte Phosphorylierung von pAKT^ser473 und pAKT^Thr308 in A549- und H1703-Zellen. Deforolimus in Kombination mit den MEK-Inhibitoren CI-1040 oder PD0325901 zeigt dosisabhängigen Synergismus in Lungenkrebszelllinien, der mit der Unterdrückung der Proliferation und nicht mit der Steigerung des Zelltods verbunden ist, wobei die Hemmung der ribosomalen Biogenese um 40% innerhalb von 24 Stunden und ein verringertes Polysom/Monosom-Verhältnis eine Rolle spielen. [2]

Die Verabreichung von Deforolimus übt in Mäusen mit PC-3 (Prostata), HCT-116 (Kolon), MCF7 (Brust), PANC-1 (Pankreas) oder A549 (Lunge) Xenografts dosisabhängig signifikante Antitumorwirkungen aus und hemmt die mTOR-Signalübertragung im SK-LMS-1 Xenograft-Modell, verbunden mit der Hemmung des Tumorwachstums. [1]

• Zellbasierte Zielhemmung

  HT-1080-Zellen werden vor der Ernte 2 Stunden lang mit steigenden Konzentrationen von Deforolimus (0-100 nM) behandelt. Zelllysate werden in denaturierendem Lysepuffer extrahiert, auf SDS-PAGE aufgetrennt und auf PVDF-Membranen transferiert. Nach dem Blockieren werden die Membranen 1 Stunde lang mit primären Antikörpern inkubiert, gefolgt von geeigneten HRP-konjugierten sekundären Antikörpern 1 Stunde lang bei Raumtemperatur. Immunreaktive Proteine werden mittels verbesserter Chemilumineszenz und Autoradiographie durch Exposition gegenüber Röntgenfilm nachgewiesen. Die IC50 wird aus der Hemmung der Spiegel von phosphoryliertem ribosomalem Protein S6 (p-S6) und 4E-BP1 (p-4E-BP1) bestimmt.

• Zelllinien

  Colo205, H1755, H1395, H1666, A549, H157, and H1703 cells

• Konzentrationen

  Dissolved in ethanol, final concentrations ~ 1 μM

• Inkubationszeit

  72-120 hours

• Methode

  Cells are seeded at 2-3 × 10⁴/mL, and serial dilutions of Deforolimus are added after 2 hours, for at least three cell doublings (72-120 hours). Deforolimus effects are measured using the CellTiter 96 Aqueous nonradioactive cell proliferation assay and Sulforhodamine B assays. For Deforolimus, growth effects are described as IC30 because rapamycin and its derivatives do not significantly impede cell proliferation.

• Tiermodelle

  Male and female athymic NCr-nu mice with xenografts established by subcutaneous implantation of PC-3, A549, HCT-116, MCF7, PANC-1 and SK-LMS-1 tumors

• Dosierungen

  ~10 mg/kg

• Verabreichung

  Intraperitoneally