Enzastaurin

Die Anwendung von Enzastaurin führt zu einer deutlichen dosisabhängigen Hemmung des Wachstums in allen untersuchten MM-Zelllinien, einschließlich MM.1S, MM.1R, RPMI 8226 (RPMI), RPMI-Dox40 (Dox40), NCI-H929, KMS-11, OPM-2 und U266, mit IC50-Werten von 0,6-1,6 μM. Diese Verbindung wirkt direkt auf menschliche Tumorzellen, induziert Apoptose und unterdrückt die Proliferation in kultivierten Tumorzellen. Sie unterdrückt auch die Phosphorylierung von GSK3β^ser9, dem ribosomalen Protein S6S240/244 und AKTThr308, während sie keinen direkten Effekt auf die VEGFR-Phosphorylierung hat. [1] Diese Chemikalie erhöht die Apoptose in malignen Lymphozyten von CTCL. In Kombination mit GSK3-Inhibitoren zeigte sie eine Verbesserung der Zytotoxizitätsniveaus. Die Behandlung mit einer Kombination dieser Verbindung und des GSK3-Inhibitors AR-A014418 führte zu erhöhten Spiegeln an β-Catenin-Gesamtprotein und β-Catenin-vermittelter Transkription. Die Blockierung der β-Catenin-vermittelten Transkription oder der kleine Haarnadel-RNA (shRNA)-Knockdown von β-Catenin induzierte die gleichen zytotoxischen Effekte wie die Kombination mit AR-A014418. Zusätzlich führte die Behandlung mit dieser Verbindung und AR-A014418 zu einer Abnahme der mRNA-Spiegel und der Oberflächenexpression von CD44. [2]

Die Behandlung von Xenotransplantaten mit Enzastaurin und Strahlung führte zu einer stärkeren Verringerung der Mikrovaskulaturdichte als jede Einzelbehandlung. Die Abnahme der Mikrovaskulaturdichte korrelierte mit einem verzögerten Tumorwachstum. [3]

• Kinase-Inhibitions-Assays

  Die Hemmung der PKCβII-, PKCα-, PKCε- oder PKCγ-Aktivität durch Enzastaurin wird unter Verwendung eines Filterplatten-Assay-Formats bestimmt, das den ³³P-Einbau in Myelin-Basismembran-Substrat misst. Die Reaktionen werden in 100 μL Reaktionsvolumen in 96-Well-Polystyrolplatten unter folgenden Endbedingungen durchgeführt: 90 mM HEPES (pH 7,5), 0,001 % Triton X-100, 4 % DMSO, 5 mM MgCl₂, 100 μM CaCl₂, 0,1 mg/mL Phosphatidylserin, 5 μg/mL Diacetylglycerin, 30 μM ATP, 0,005 μCi/μL ³³ATP, 0,25 mg/mL Myelin-Basismembran-Protein, serielle Verdünnungen dieser Verbindung (1-2.000 nM) und rekombinante humane PKCβII-, PKCα-, PKCε- oder PKCγ-Enzyme (390, 169, 719 bzw. 128 pM). Die Reaktionen werden durch Zugabe des Enzyms gestartet und 60 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Anschließend werden sie mit 10 % H₃PO₄ gequencht, auf Multiscreen-Anionen-Phosphocellulose-96-Well-Filterplatten überführt, 30 bis 90 Minuten inkubiert, filtriert und mit 4 Volumen 0,5 % H₃PO₄ auf einem Vakuumverteiler gewaschen. Szintillationscocktail wird hinzugefügt und die Platten auf einem Microbeta-Szintillationszähler ausgelesen. IC50-Werte werden durch Anpassung einer logistischen Drei-Variablen-Gleichung an die 10-Punkt-Dosis-Wirkungsdaten unter Verwendung von ActivityBase 4.0 bestimmt.

• Zelllinien

  HCT116 and U87MG cells

• Konzentrationen

  0.3-4 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Induction of apoptosis by enzastaurin is measured by nucleosomal fragmentation and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling (TUNEL) and staining in HCT116 and U87MG cell lines. Briefly, 5 × 10³ cells are plated per well in 96-well plates (1% FBS-supplemented media conditions), incubated with or without this compound for 48 to 72 hours. The absorbance values are normalized to those from control-treated cells to derive a nucleosomal enrichment factor at all concentrations as per the manufacturer's protocol. The concentrations studied ranges from 0.1 to 10 μM. In situ TUNEL staining is assayed with the In situ Cell Death Detection. Cells (7.5 ?10⁴) are plated per well in 6-well plates and incubated 72 hours in 1% FBS-supplemented media ?this chemical. labeled DNA strand breaks are detected with the BD epics flow cytometer. Ten thousand, single-cell, FITC-staining events are collected for each test.

• Tiermodelle

  Athymic nude mice; Mouse besring human MM tumors

• Dosierungen

  75 mg/kg twice daily; 30 mg/kg twice daily

• Verabreichung

  By gavage