In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich. * Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen. * Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)
Vorbereitung von Stammlösungen
Biologische Aktivität
Beschreibung
Epothilone A ist ein Paclitaxel-ähnlicher Mikrotubuli-stabilisierender Wirkstoff mit einer EC0.01 von 2 μM.
Ziele
Tubulin
2 μM(EC0.01)
In vitro
Epothilone A, entdeckt aus dem Myxobakterium Sorangium cellulosum, ist ein Taxol-ähnlicher Mikrotubuli-stabilisierender Wirkstoff, der die Tubulinpolymerisation induziert, was zu einem Zellzyklusarrest am G2-M-Übergang, Zytotoxizität und Apoptose führt. Diese Verbindung hemmt potent die Zellproliferation in HCT116-Zellen mit einer IC50 von 4,4 nM. Es zeigt auch Zytotoxizität in KB3-1-, KBV-1-, Hela- und Hs578T-Zellen mit IC50-Werten im Bereich von 13 nM bis 160 nM. Diese Chemikalie ist wasserlöslicher als Taxol und konkurriert mit Taxol bei der Bindung an Mikrotubuli mit einer IC50 von 2,3 μM. Allerdings teilen weder diese Verbindung noch Taxol ein gemeinsames Pharmakophor und nutzen die Tubulin-Bindungstasche einzigartig und unabhängig. Kürzlich wurde festgestellt, dass die mikrobiologische Umwandlung dieser Verbindung durch Aspergillus niger AS 3.739 mehrere Metaboliten liefert, die auch für MCF-7-Zellen toxisch sind, aber mit viel höheren IC50-Werten.
Mikrotubulusproteine (MTP) aus Kälberhirn werden gereinigt, was ungefähr 15%-20% an Microtubule Associated Proteinen umfasst. Der Puffer (MES-Puffer), der für die Epothilone A-Microtubule-Studien verwendet wird, enthält 0,1 M 2-Morpholinoethansulfonsäure (MES), 1 mM EGTA, 0,5 mM MgCl2 und 3 M Glycerin bei pH 6,6. Proben für die Elektronenmikroskopie werden auf kohlenstoffbedampfte Parlodion-beschichtete Gitter (300 mesh) gelegt und negativ mit 2% Uranylacetat gefärbt. Die Mikrotubulusbildung in An- oder Abwesenheit dieser Verbindung wird spektrophotometrisch mit einem Spektrophotometer überwacht, das mit einem thermostatisch geregelten Flüssigkeitszirkulator ausgestattet ist. Die Temperatur wird bei 35 °C gehalten und Änderungen der Trübung (repräsentativ für die Polymermasse) werden bei 350 nm überwacht. Die effektive Konzentration (EC0.01), definiert als die interpolierte Konzentration, die eine Anfangssteigung von 0,01 OD/min induzieren kann, wird mit der Formel EC0.01 = Konzentration/Steigung berechnet und als Mittelwert mit Standardabweichung aus drei verschiedenen Konzentrationen ausgedrückt.
24 hours for mitotic arrest or 72 hours for cytotoxicity
Methode
For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for trypan blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, cells are treated with Epothilone A and are scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as trypan blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst 33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2-M transition and aberrant mitosis.
Referenzen
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11506611/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/7757983/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15297674/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19431017/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/1672157/
Sellecks Epothilone A Wurde zitiert von 6 Publikationen
β3 accelerates microtubule plus end maturation through a divergent lateral interface
[ Mol Biol Cell, 2025, 36(4):ar36]
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Selleck-Produkte werden bei Raumtemperatur transportiert. Wenn Sie das Produkt bei Raumtemperatur erhalten, seien Sie versichert, dass die Qualitätskontrollabteilung von Selleck Experimente durchgeführt hat, um zu überprüfen, dass die normale Temperaturplatzierung von einem Monat die biologische Aktivität von Pulverprodukten nicht beeinträchtigt. Nach dem Sammeln lagern Sie das Produkt bitte gemäß den in der Datenblatt beschriebenen Anforderungen. Die meisten Selleck-Produkte sind unter den empfohlenen Bedingungen stabil.
NICHT FÜR DIE ANWENDUNG AM MENSCHEN, FÜR VETERINÄRMEDIZINISCHE DIAGNOSTIK ODER THERAPEUTISCHE ZWECKE.
