Patupilone (Epothilone B)

Patupilone (Epothilone B) zeigt eine bessere Aktivität als Epothilon A, mit einem EC_0.01 von 1,8 μM. Es hemmt die Zellproliferation in HCT116-Zellen potent mit einer IC50 von 0,8 nM. [1] Diese Verbindung induziert einen Mitosearrest und zeigt Zytotoxizität in KB3-1-, KBV-1-, Hela- und Hs578T-Zellen, mit einer IC50 von 3 nM bis 92 nM. Es konkurriert mit Taxol bei der Bindung an Mikrotubuli, mit einer IC50 von 3,3 μM. [2] In MCF-7-Zellen, die GFP-α-Tubulin überexprimieren, blockiert es (3,5 nM) effizient die Mikrotubuli-Dynamik. Gleichzeitig induziert es einen Mitosearrest mit einer IC50 von 3,5 nM. [3] In Multiples-Myelom (MM)-Zellen, einschließlich RPMI 8226, U266, MM.1S, LR5 und MR20, unterdrückt es direkt die Proliferation mit einer IC50 von 1 nM bis 10 nM. Ähnlich induziert es (10 nM) auch einen Zellzyklusarrest und Apoptose. [4] Eine aktuelle Studie zeigt, dass es in Ovarialkarzinom-Hey-Zellen (5 nM–100 nM) das Epithelialzell-Adhäsionsantigen (EpCAM) auf der Oberfläche verstärkt, ohne die Transkription oder das gesamte zelluläre Niveau von EpCAM zu beeinflussen. [5]

In einem Maus-Xenograft-Modell von RPMI 8226-Zellen verlängert Patupilone (Epothilone B) (2,5 mg/kg–4 mg/kg) das Überleben und unterdrückt das Tumorwachstum. [4] Ähnlich hemmt diese Verbindung in der gleichen Dosis auch das Tumorwachstum in Maus-Xenograft-Modellen von Prostatakrebszellen, einschließlich DU145 und PC3. [6]

• Tubulinpolymerisationsassay

  Kälberhirn-Mikrotubulusproteine (MTP) werden gereinigt, wobei sie ca. 15%–20% Mikrotubulus-assoziierte Proteine enthalten. Der für die Epothilon B-Mikrotubulus-Studien verwendete Puffer (MES-Puffer) enthält 0,1 M 2-Morpholinoethansulfonsäure (MES), 1 mM EGTA und 0,5 mM MgCl₂ bei pH 6,6. Proben für die Elektronenmikroskopie werden auf Kohlenstoff-über-Parlodion-beschichtete Gitter (300 mesh) gelegt und negativ mit 2% Uranylacetat gefärbt. Die Mikrotubulus-Assemblierung in An- oder Abwesenheit von Patupilone (Epothilone B) wird spektrophotometrisch mittels eines Spektrophotometers überwacht, das mit einem thermostatisch geregelten Flüssigkeitszirkulator ausgestattet ist. Die Temperatur wird bei 35 °C gehalten und Änderungen der Trübung (repräsentativ für die Polymermasse) werden bei 350 nm überwacht. Die effektive Konzentration (EC_0.01), definiert als die interpolierte Konzentration, die eine anfängliche Steigung von 0,01 OD/min induzieren kann, wird unter Verwendung der Formel EC_0.01 = Konzentration/Steigung berechnet und als Mittelwert mit Standardabweichung aus drei verschiedenen Konzentrationen ausgedrückt.

• Zelllinien

  KB3-1, KBV-1, Hela, and Hs578T cells

• Konzentrationen

  0–1 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  For mitotic block and aberrant mitosis, cells are plated either in 48-well plates (for blue and cell counting) or onto coverslips. After 24 hours, they are treated with Patupilone (Epothilone B) and scored at regular intervals. For the cytotoxicity analysis, cells are counted and scored as blue positive or negative. Concurrently, coverslips and aliquots of cells in the culture supernatant are fixed and stained with Hoechst33342 in PBS. These cells are scored for cells blocked at the G2/M transition and aberrant mitosis.

• Tiermodelle

  Mice xenograft model of RPMI 8226 cells

• Dosierungen

  2.5 mg/kg–4 mg/kg

• Verabreichung

  Inject intravenously