GSK1059615

Katalog-Nr.S1360 Charge:S136001

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Technische Daten

Formel

C18H11N3O2S
Molekulargewicht 333.36 CAS-Nr. 958852-01-2
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 2 mg/mL (5.99 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.100mg/ml (0.30mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.

 0.100mg/ml (0.30mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 2 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung GSK1059615 ist ein dualer Inhibitor von PI3Kα/β/δ/γ (reversibel) und mTOR mit einer IC50 von 0,4 nM/0,6 nM/2 nM/5 nM bzw. 12 nM. Phase 1.
Ziele
PI3Kα
(Cell-free assay)		 PI3Kβ
(Cell-free assay)		 PI3Kδ
(Cell-free assay)		 PI3Kγ
(Cell-free assay)		 mTOR
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.6 nM 2 nM 5 nM 12 nM
In vitro Das Pyridinylchinolin-Derivat GSK1059615 ist ein neuartiger, ATP-kompetitiver und reversibler Inhibitor der Klasse I der PI3Ks. Diese Verbindung hemmt die PI3K-Signalübertragung, induziert G1-Arrest und Apoptose, insbesondere in Brusttumorzellen. Daten, die in einer anderen Übersicht zusammengefasst wurden, zeigen auch, dass dieser Inhibitor PI3Kα, β, γ und δ hemmt, mit Ki von 0,42 nM, 0,6 nM, 0,47 nM bzw. 1,7 nM. Ein weiterer Bericht zeigt, dass diese Chemikalie PI3Kα mit einer IC50 von 2 nM hemmt. In T47D- und BT474-Krebszellen hemmt es die Phosphorylierung von Akt an S473 mit einer IC50 von 40 nM.
In vivo In Xenograft-Mausmodellen von BT474- oder HCC1954-Brustkrebszellen hemmt GSK1059615 (25 mg/kg) das Tumorwachstum wirksam.
Merkmale Ein neuartiger, ATP-kompetitiver und reversibler Inhibitor sowohl von PI3Kα, β, δ und γ als auch von mTOR.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[4]
  • HTRF In-vitro-Profilierungsassays zur PI3K-Hemmung

    Die Messung der GSK1059615-abhängigen Hemmung der PI3Ks erfolgt mittels eines HTRF-basierten PI3K-Profilierungsassay-Kits. 400 pM Enzym werden in PI3Kα- und δ-Assays verwendet, 200 pM in PI3Kβ-Assays und 1 nM in PI3Kγ-Assays. Zusätzlich werden die PI3Kα-, β- und δ-Assays mit 150 mM NaCl und 100 μM ATP durchgeführt, während der PI3Kγ-Assay ohne NaCl und mit 15 μM ATP durchgeführt wird. Alle Reaktionen werden bei 10 μM PIP2 durchgeführt. Diese Verbindung wird seriell verdünnt (3-fach in DMSO), und 50 nL werden in eine 384-Well-Low-Volume-Assay-Platte überführt. Der PI3K-Reaktionspuffer wird durch Verdünnung des Stammlösung 1:4 mit deionisiertem Wasser hergestellt. Frisch zubereitetes DTT wird am Tag der Verwendung in einer Endkonzentration von 5 mM hinzugefügt. Enzymzugabe und chemische Vorinkubation werden durch die Zugabe von 2,5 μL PI3K in Reaktionspuffer eingeleitet. Die Platten werden 15 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 2,5 μL 2x Substratlösung (PIP2 und ATP in 1x Reaktionspuffer) eingeleitet. Die Platten werden eine Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 2,5 μL Stopplösung abgeschreckt. Die abgeschreckten Reaktionen werden dann zur Detektion der Produktbildung verarbeitet, indem 2,5 μL Detektionslösung hinzugefügt werden. Nach einer 1-stündigen Inkubation im Dunkeln wird das HTRF-Signal auf dem Envision-Plattenlesegerät bei 330 nm Anregung und dualer Emissionsdetektion bei 620 nm (Eu) und 665 nm (APC) gemessen. Der IC50-Wert wird dann erhalten.
Zell-Assay:[4]
  • Zelllinien

    T47D and BT474 cells

  • Konzentrationen

    0–1 μM, serially diluted (3-fold) in DMSO

  • Inkubationszeit

    30 min

  • Methode

    Cells are plate at a density of 1 × 104 cells per well in clear flat-bottomed 96-well plates and incubated overnight. Then, GSK1059615 is added and the plates are incubated for 30 min. At the end of incubation, media is aspirated from the plates, and the plate is wash once with cold PBS. 80 μL MSD Lysis buffer is added into each well and the plates are incubated on a shaker at 4 °C for at least 30 min. For Akt duplex assay, plates are washed with 200 μL/well wash buffer for 4 times and tapped on paper towel to blot. Then, 60 μL lysates is added to each well and the plates are incubated on shaker at room temperature for 1 hour. After another 4 times washing, antibody is added (25 μL per well) and the plates are incubated on shaker for 1 hour and washed again. Finally, Read Buffer is added (150 μL per well) and the plates are read immediately. IC50 values are then obtained.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19589091/
  • #
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20582534/
  • http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ml900028r

Kundenproduktvalidierung

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of GSK1059615 for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

, , Antonino Maria Spartà from University of Bologn

<p>For MTT assays, cells (2,000 ~ 5,000 cells/well) were subcultured into 96-well plates according to their growth properties. Cell proliferation was assayed at 72 hr after treatment of GSK1059615 by adding 20 μl of 5 mg/ml 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) solution per 100 μl of growth medium. After incubating for 3-4 h at 37°C, the media were removed and 150 µl/well of MTT solvent (either absolute DMSO or isopropanol containing 4 μM HCl and 0.1% Nonidet-40) was added to dissolve the formazan. The absorbance of each well was measured by ELx808 (BioTek, Winooski, VT) or Wallac Victor2 (Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA) Microplate Reader. Viable cells are presented as percent of control, vehicle-treated cells.</p>

, , Dr. Yong-Weon Yi from Georgetown University Medical Center

<p>We treated all of drugs in T47D which has a PI3KCA H1044R mutation with the concentration shown below for 1 hour and performed western blot analysis using antibodies to phospho-AKT(SERINE 472), and total AKT.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

Sellecks GSK1059615 Wurde zitiert von 15 Publikationen

PIK-75 overcomes venetoclax resistance via blocking PI3K-AKT signaling and MCL-1 expression in mantle cell lymphoma [ Am J Cancer Res, 2022, 12(3):1102-1115] PubMed: 35411248
Phytochemicals inhibit migration of triple negative breast cancer cells by targeting kinase signaling. [ BMC Cancer, 2020, 20(1):4] PubMed: 31898540
Lethal Poisoning of Cancer Cells by Respiratory Chain Inhibition plus Dimethyl α-Ketoglutarate [ Cell Rep, 2019, 27(3):820-834] PubMed: 30995479
FRET biosensor-based kinase inhibitor screen for ERK and AKT activity reveals differential kinase dependencies for proliferation in TNBC cells. [ Biochem Pharmacol, 2019, 169:113640] PubMed: 31536726
[ ACS Pharmacol Transl Sci, 2019, ] PubMed: 32259061
Inhibition of RPTOR overcomes resistance to EGFR inhibition in triple-negative breast cancer cells [ Int J Oncol, 2018, 52(3):828-840] PubMed: 29344641
Development of a test that measures real-time HER2 signaling function in live breast cancer cell lines and primary cells. [Huang Y, et al. BMC Cancer, 2017, 17(1):199] PubMed: 28302091
Single and Combination Drug Screening with Aqueous Biphasic Tumor Spheroids [ SLAS Discov, 2017, 22(5):507-515] PubMed: 28324660
Gerosuppression by pan-mTOR inhibitors [ Aging (Albany NY), 2016, 8(12):3535-3551] PubMed: 28077803
Multiparametric Analysis of Oncology Drug Screening with Aqueous Two-Phase Tumor Spheroids. [ Mol Pharm, 2016, 13(11):3724-3735] PubMed: 27653969

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