GSK461364

GSK461364 hemmt die Proliferation von Krebszelllinien verschiedener Ursprünge mit minimaler Toxizität in nicht-teilenden menschlichen Zellen. [1] Die RNA-Silencing von WT p53 erhöht die antiproliferative Aktivität dieser Verbindung. Da viele Krebstherapien bei p53-WT-Patienten tendenziell wirksamer sind, könnte die höhere Empfindlichkeit von p53-defizienten Tumoren gegenüber dieser Chemikalie potenziell eine Möglichkeit bieten, Tumoren zu behandeln, die gegenüber anderen Chemotherapien refraktär sind, sowie eine Erstlinientherapie für diese Genotypen. Diese Verbindung ist ein Thiophenamid, das das gereinigte Plk1-Enzym in vitro mit einem K_i von 2 nM hemmt und eine >100-fache Selektivität für Plk1 im Vergleich zu Plk2 und Plk3 aufweist. Es ist ein potenter Inhibitor der Zellproliferation, der in den meisten der getesteten Zelllinien eine 50%ige Wachstumshemmung (GI50) unter 100 nM verursacht, mit begrenzter Toxizität gegenüber menschlichen nicht-proliferierenden Zellen. Die Hemmung des Cell Cycle-Fortschritts ist konzentrationsabhängig, mit anfänglicher Verzögerung in der G2-Phase bei hohen Konzentrationen dieses Wirkstoffs und Arrest in der M-Phase bei niedrigeren Konzentrationen. Derzeit befindet es sich in einer Dosis-Eskalationsstudie am Menschen. Zelllinien mit Mutationen im TP53-Gen waren tendenziell empfindlicher gegenüber dieser Verbindung, und die Hemmung der p53-Antwort durch RNA-Silencing führt zu einer erhöhten Empfindlichkeit in einigen p53-Wildtyp (WT)-Zellen. Darüber hinaus weisen diese empfindlicheren Zelllinien auch erhöhte Chromosomeninstabilität auf, ein Merkmal, das mit TP53-Mutationen assoziiert ist. [2] In präklinischen Tests zeigt diese Chemikalie antiproliferative Aktivität gegen mehrere (>120) Tumorzelllinien und hemmt potent die Proliferation von mehr als 83% und 91% dieser Zelllinien mit IC50-Werten von weniger als 50 bzw. 100 nM. [3]

Die Hemmung des Zellkulturwachstums durch GSK461364 kann zytostatisch oder zytotoxisch sein, führt aber bei richtiger Dosierungsplanung zu einer Tumorregression in Xenograft-Tumormodellen. Diese Verbindung zeigt eine klare Antitumoraktivität in menschlichen Tumor-Xenograft-Modellen. [1] Sie zeigt einen dosisabhängigen mitotischen Arrest in Maus-Xenografts, der mit den Auswirkungen auf das Tumorwachstum korreliert. [2] Die intraperitoneale Verabreichung dieser Chemikalie führt zu einer Regression oder Verzögerung des Tumorwachstums in verschiedenen Xenograft-Modellen, einschließlich Colo205-Xenografts. Die In-vivo-Unterdrückung von Plk1 durch diesen Wirkstoff führt zu einem mitotischen Arrest mit aberranten Mitosefiguren, bestehend aus monopolaren oder kollabierten Mitosespindeln. [3]

• Enzymassays

  Kinase-Reaktionen werden in einem finalen Assay-Volumen von 10 μL unter Verwendung des Z-Lyte Assay-Kits (Ser/Thr Peptid 16) durchgeführt. Kurz gesagt, die Reaktionen enthalten 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0,01% Brij 35, 0,01 mg/mL Casein, 200 μM ATP, 200 μM Polo Box Peptid (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH) und 6 nM rekombinantes Plk1 (H6-tev-PLK 1-603). Plk1 wird für 60 Minuten mit 0 bis 1 μM GSK461364 vorinkubiert. Die Reaktionen werden dann durch Zugabe von 2 μM Peptid initiiert. Nach 15 Minuten bei 23 °C werden die Reaktionen abgebrochen und gemäß dem Z′-Lyte-Protokoll verarbeitet und auf einem EnVision-Plattenleser abgelesen. Rohe Fluoreszenzwerte werden unter Verwendung von Substrat- und Produktstandards in die Konzentration des gebildeten Produkts umgewandelt. Da die Hemmwirkung dieser Verbindung als Funktion der ATP-Konzentration auf eine Weise variiert, die mit einem ATP-kompetitiven Hemmungsmodus übereinstimmt, wird eine Obergrenze für den K_i dieser Chemikalie bestimmt.

• Zelllinien

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• Konzentrationen

  10 nM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• Tiermodelle

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• Dosierungen

  25, 50, and 100 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)