GSK690693

GSK690693 ist sehr selektiv für die Akt-Isoformen gegenüber der Mehrheit der Kinasen in anderen Familien. Allerdings ist diese Verbindung weniger selektiv für Mitglieder der AGC-Kinase-Familie, einschließlich PKA, PrkX und PKC-Isoenzyme, mit IC50 von 24 nM, 5 nM bzw. 2-21 nM. Es hemmt auch potent AMPK und DAPK3 aus der CAMK-Familie mit IC50 von 50 nM bzw. 81 nM, und PAK4, 5 und 6 aus der STE-Familie mit IC50 von 10 nM, 52 nM bzw. 6 nM. Diese Chemikalie hemmt die Phosphorylierung von GSK3β in Tumorzellen mit IC50-Werten von 43 nM bis 150 nM. Ihre Behandlung führt zu einer dosisabhängigen Zunahme der nukleären Akkumulation des Transkriptionsfaktors FOXO3A. Diese Verbindung hemmt potent die Proliferation von T47D-, ZR-75-1-, BT474-, HCC1954-, MDA-MB-453- und LNCaP-Zellen mit IC50 von 72 nM, 79 nM, 86 nM, 119 nM, 975 nM bzw. 147 nM. Ihre Behandlung induziert Apoptose bei Konzentrationen >100 nM sowohl in LNCaP- als auch in BT474-Zellen. [1] Im Einklang mit der Rolle von AKT beim Überleben von Zellen induziert es Apoptose in empfindlichen ALL-Zelllinien. [2]

Eine einzige Verabreichung von GSK690693 hemmt die GSK3β-Phosphorylierung in menschlichen Brustkarzinom- (BT474) Xenografts dosis- und zeitabhängig. In ähnlicher Weise induziert diese Verbindung eine Reduktion der Phosphorylierung der Akt-Substrate PRAS40 und FKHR/FKHRL1. Sie führt auch zu einem akuten Anstieg des Blutzuckerspiegels, der 8 bis 10 Stunden nach der Medikamentenverabreichung auf den Ausgangswert zurückkehrt. Die Verabreichung dieser Chemikalie induziert in vivo Reduktionen der phosphorylierten Akt-Substrate und hemmt potent das Wachstum von menschlichen SKOV-3-Ovarial-, LNCaP-Prostata- sowie BT474- und HCC-1954-Brustkarzinom-Xenografts, mit einer maximalen Hemmung von 58 % bis 75 % bei einer Dosis von 30 mg/kg/Tag. [1] Diese Verbindung zeigt Wirksamkeit unabhängig vom Mechanismus der Akt-Aktivierung. Sie ist am effektivsten bei der Verzögerung der Tumorprogression in Lck-MyrAkt2-Mäusen, die eine membrangebundene, konstitutiv aktive Form von Akt exprimieren. [3]

• In-vitro-Kinase-Assays

  His-markierte, vollständige Akt1, 2 oder 3 werden aus Baculovirus exprimiert und gereinigt. Die Aktivierung erfolgt mit gereinigtem PDK1 zur Phosphorylierung von Thr308 und gereinigtem MK2 zur Phosphorylierung von Ser473. Um die zeitabhängige Hemmung von Akt genauer zu messen, werden aktivierte Akt-Enzyme mit GSK690693 in verschiedenen Konzentrationen bei Raumtemperatur für 30 Minuten inkubiert, bevor die Reaktion durch Zugabe des Substrats eingeleitet wird. Die Endreaktion enthält 5 nM bis 15 nM Akt1-, 2- und 3-Enzyme; 2 μM ATP; 0,15 μCi/μL [γ-³³P]ATP; 1 μM Peptid (Biotin-aminohexansäure-ARKR-ERAYSFGHHA-amid); 10 mM MgCl₂; 25 mM MOPS (pH 7,5); 1 mM DTT; 1 mM CHAPS; und 50 mM KCl. Die Reaktionen werden 45 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und anschließend mit Leadseeker-Beads in PBS, das EDTA enthält (Endkonzentration: 2 mg/mL Beads und 75 mM EDTA), abgebrochen. Die Platten werden dann versiegelt, die Beads dürfen sich mindestens 5 Stunden lang absetzen, und die Produktbildung wird mit einem Viewlux Imager quantifiziert.

• Zelllinien

  T47D, ZR-75-1, BT474, HCC1954, MDA-MB-453, LNCaP, etc.

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~30 μM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Cells are plated at densities that allow untreated cells to grow logarithmically during the course of a 3-day assay. Briefly, cells are plated in 96- or 384-well plates and incubated overnight. Cells are then treated with this compound (ranging from 30 μM-1.5 nM) and incubated for 72 hours. Cell proliferation is measured using the CellTiter Glo reagent. Data are analyzed using the XLFit curve-fitting tool for Microsoft Excel. IC50 values are obtained by fitting data to Eq, 2.

• Tiermodelle

  Female CD1 Swiss Nude mice injected with LNCaP, SKOV-3, or PANC1 cells, and C.B-17 SCID mice with HCC1954, MDA-MB-453, or BT474 cells

• Dosierungen

  ~30 mg/kg/day

• Verabreichung

  Administered via i.p.