HA14-1

HA14-1 ist ein kleines Molekül und nicht-peptidischer Ligand einer Bcl-2-Oberflächentasche mit einer IC50 von etwa 9 μM. Diese Verbindung induziert die Apoptose von HL-60-Zellen dosisabhängig über die Caspase-Aktivierung. [1] Es zeigt zytotoxische Effekte auf die follikulären Lymphom-B-Zelllinien HF1A3, HF4.9 und HF28RA mit LC50-Werten von 4,5 μM, 12,6 μM bzw. 8,1 μM. Diese Chemikalie induziert die Apoptose von HF1A3-, HF4.9- und HF28RA-Zellen über Caspase und ROS. [2]

HA14-1(400 nM) Behandlung hatte keinen signifikanten Effekt auf das Wachstum von Glioblastom-Tumoren in immundefizienten Mäusen. Aber diese Verbindung erhöht die Wirkung des DNA-schädigenden Agens auf das Glioblastom-Wachstum in vivo. [3]

• Affinitätsbestimmung

  Die Bindungsaffinität organischer Verbindungen an das Bcl-2-Protein in vitro wird durch einen kompetitiven Bindungstest basierend auf Fluoreszenzpolarisation bestimmt. Für diesen Test wird 5-Carboxyfluorescein an den N-Terminus eines Peptids, GQVGRQLAIIGDDINR, gekoppelt, das aus der BH3-Domäne von Bak (Flu-BakBH3) stammt und gezeigt hat, dass es mit hoher Affinität an die Oberflächentasche des Bcl-xL-Proteins bindet. Gemäß unseren molekularen Modellierungsstudien und Bindungsmessungen mittels Fluoreszenzpolarisation bindet das Flu-BakBH3-Peptid mit ähnlicher Affinität an die Oberflächentasche von Bcl-2. Das in diesem Test verwendete Bcl-2 ist ein rekombinantes GST-fusionslösliches Protein. Flu-BakBH3 und Bcl-2-Protein werden in Anwesenheit oder Abwesenheit organischer Verbindungen unter Standardpufferbedingungen gemischt und 30 Minuten inkubiert. Die Bindung von Flu-BakBH3 an das Bcl-2-Protein wird an einem LS-50 Lumineszenzspektrometer, ausgestattet mit Polarisatoren, unter Verwendung einer Quarzzelle mit doppelter Pfadlänge (500 μl) gemessen. Der Fluorophor wird mit vertikal polarisiertem Licht bei 480 nm (Anregungsschlitzbreite 15 nm) angeregt, und der Polarisationswert des emittierten Lichts wird durch vertikale und horizontale Polarisatoren bei 530 nm (Emissionsschlitzbreite 15 nm) beobachtet. Die Bindungsaffinität jeder Verbindung für das Bcl-2-Protein wird durch Bestimmung der Fähigkeit verschiedener Konzentrationen der Verbindung bewertet, die Bindung von Flu-BakBH3 an Bcl-2 zu hemmen.

• Zelllinien

  HF1A3, HF4.9 and HF28RA cells

• Konzentrationen

  ~25 μM

• Inkubationszeit

  20 h

• Methode

  The cytotoxic effects of HA14-1 against different FL cell lines are determined by the MTT assay. Briefly, the cells (5000/well) are incubated in triplicate in 96-well plate in the presence or absence of this compound for 20 h at 37 °C. Thereafter, the MTT solution is added to each well. After 4 h incubation at 37 °C, the optical density (OD) is measured by means of 96-well plate reader, with the extraction buffer as a blank. The following formula is used: percentage cell viability = (OD of the experiment samples/OD of the control) × 100. Sigmoidal dose-response curves are fitted to the mean cell viability plotted against log this chemical dose and lethal concentration 50% (LC50) values are calculated from the resulting curves using Prism 4.0 softw

• Tiermodelle

  Female Swiss nude mice bearing BeGBM xenografts.

• Dosierungen

  400 nM

• Verabreichung

  Inject at the site of cell injection.