Hesperadin

Katalog-Nr.S1529 Charge:S152901

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Technische Daten

Formel

C₂₉H₃₂N₄O₃S

Molekulargewicht

516.65

CAS-Nr.

422513-13-1

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

103 mg/mL (199.36 mM)

Ethanol

1 mg/mL (1.93 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

Hesperadin hemmt Aurora B mit einem IC50 von 250 nM in einem zellfreien Assay. Es reduziert die Aktivität von AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 und PHK deutlich, während es die MKK1-Aktivität in vivo nicht hemmt.

Ziele

TbAUK1 (Cell-free assay)	Aurora B (human) (Cell-free assay)
40 nM	250 nM

In vitro

Hesperadin hemmt die Fähigkeit von immunpräzipitiertem Aurora B, Histon H3 mit einer IC50 von 250 nM zu phosphorylieren, und reduziert die Aktivität anderer Kinasen (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 und PHK) bei einer Konzentration von 1 μM deutlich. Im Gegensatz dazu sind nur 20-100 nM dieser Verbindung ausreichend, um den Verlust der mitotischen Histon H3-Ser10-Phosphorylierung in HeLa-Zellen zu induzieren. Die Behandlung damit führt zu Defekten in der Mitose und Zytokinese, was zum Stillstand der Proliferation von HeLa-Zellen und zur Polyploidisierung führt, die spezifisch auf die Hemmung der Aurora B-Funktion während des Chromosomenanheftungsprozesses zurückzuführen ist. Diese Verbindung (100 nM) überwindet schnell den durch Taxol oder Monastrol induzierten mitotischen Arrest, jedoch nicht den durch Nocodazol. Die Behandlung mit ihr und Nocodazol in HeLa-Zellen hebt die Kinetochorlokalisation von BubR1 auf und verringert die Intensität von Bub1 an den Kinetochoren, was darauf hindeutet, dass die Aurora B-Funktion für die effiziente Kinetochor-Rekrutierung von BubR1 und Bub1 erforderlich ist, was wiederum für eine verlängerte Checkpoint-Signalgebung notwendig sein könnte. Es verhindert die Phosphorylierung von rekombinantem Trypanosomen-Histon H3 durch die T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) aus pathogenen Trypanosoma brucei mit einer IC50 von 40 nM in In-vitro-Kinase-Assays. Diese Chemikalie hemmt das Zellwachstum von kultivierten infektiösen Blutstromformen (BF) signifikant mit einer IC50 von 48 nM und hemmt das Zellwachstum von Insektenstadium-Prozyklischen Formen (PF) nur schwach mit einer IC50 von 550 nM.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	Der Aurora B-Kinase-Assay Für den Aurora B-Kinase-Assay werden HeLa-Zellen in einem Puffer, der 50 mM NaCl enthält, lysiert. Der Gesamtzellextrakt wird 20 Minuten lang bei 13.000 U/min und 4 °C in einer Tischzentrifuge zentrifugiert. Der aus 200 mg Gesamtzellextrakt gewonnene Pellet wird erneut in 15 ml Lysepuffer, der 250 mM NaCl enthält, extrahiert, um aktive Aurora B-Kinase aus mitotischem Chromatin zu erhalten. Der Niedriggeschwindigkeitsüberstand des letzteren Extrakts wird für die Immunpräzipitation verwendet. Monoklonales Maus-Anti-AIM-1 oder Maus-Anti-HA wird an GammaBind Plus Sepharose gekoppelt, und die Beads werden 90 Minuten lang bei 4 °C in dem Extrakt über Kopf gedreht. Die Beads werden gewaschen, aliquotiert und in Kinasepuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF) gewaschen. Der Kinase-Assay wird mit 10 μL Beads in 20 μL Kinasepuffer, der 5 μg Histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-³²P]ATP und verschiedene Konzentrationen dieser Verbindung enthält, 20 Minuten lang bei 37 °C durchgeführt. SDS-Probenpuffer wird hinzugefügt, und die Proben werden gekocht und mittels SDS-PAGE aufgetrennt. Das Gel wird getrocknet, und das radioaktive Signal wird mittels PhosphorImager-Analyse detektiert. Die Daten werden mit der ImageQuant-Software analysiert.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien HeLa cells and PtK1 cells Konzentrationen Final concentration ~500 nM Inkubationszeit 24 and 48 hours Methode Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Kinase-Assay:^{^[1]}

Der Aurora B-Kinase-Assay
Für den Aurora B-Kinase-Assay werden HeLa-Zellen in einem Puffer, der 50 mM NaCl enthält, lysiert. Der Gesamtzellextrakt wird 20 Minuten lang bei 13.000 U/min und 4 °C in einer Tischzentrifuge zentrifugiert. Der aus 200 mg Gesamtzellextrakt gewonnene Pellet wird erneut in 15 ml Lysepuffer, der 250 mM NaCl enthält, extrahiert, um aktive Aurora B-Kinase aus mitotischem Chromatin zu erhalten. Der Niedriggeschwindigkeitsüberstand des letzteren Extrakts wird für die Immunpräzipitation verwendet. Monoklonales Maus-Anti-AIM-1 oder Maus-Anti-HA wird an GammaBind Plus Sepharose gekoppelt, und die Beads werden 90 Minuten lang bei 4 °C in dem Extrakt über Kopf gedreht. Die Beads werden gewaschen, aliquotiert und in Kinasepuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 10 mM NaF) gewaschen. Der Kinase-Assay wird mit 10 μL Beads in 20 μL Kinasepuffer, der 5 μg Histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-³²P]ATP und verschiedene Konzentrationen dieser Verbindung enthält, 20 Minuten lang bei 37 °C durchgeführt. SDS-Probenpuffer wird hinzugefügt, und die Proben werden gekocht und mittels SDS-PAGE aufgetrennt. Das Gel wird getrocknet, und das radioaktive Signal wird mittels PhosphorImager-Analyse detektiert. Die Daten werden mit der ImageQuant-Software analysiert.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
HeLa cells and PtK1 cells
Konzentrationen
Final concentration ~500 nM
Inkubationszeit
24 and 48 hours
Methode
Cells are exposed to different concentrations of Hesperadin for 24 and 48 hours. At indicated time points, methanol-fixed cell samples are washed with PBS and subsequently stained in PI buffer (50 μg/mL propidium iodide, 10 mM Tris, pH 7.5, 5 mM MgCl₂, 200 μg/mL RNase A) for 20-40 minutes at 37 °C. The DNA content is determined by flow cytometry.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12707311/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19320832/

Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: Daten von [ Nat Commun , 2011 , 2, 316 ]

: ,

: , , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Hesperadin Wurde zitiert von 52 Publikationen

Homologous recombination promotes non-immunogenic mitotic cell death upon DNA damage [ Nat Cell Biol, 2025, 27(1):59-72]	PubMed: 39805921
A CPC-shelterin-BTR axis regulates mitotic telomere deprotection [ Nat Commun, 2025, 16(1):2277]	PubMed: 40097392
Identification of chemical inhibitors targeting long noncoding RNA through gene signature-based high throughput screening [ Int J Biol Macromol, 2025, 292:139119]	PubMed: 39722392
Rsk2 inhibition induces an aneuploid post-mitotic arrest of cell cycle progression in osteosarcoma cells [ Cell Death Discov, 2025, 11(1):318]	PubMed: 40634321
Aurora B maintains spherical shape of mitotic cells via simultaneously stabilizing myosin II and vimentin [ J Mol Cell Biol, 2025, mjaf023]	PubMed: 40795355
Dynamic phosphorylation of FOXA1 by Aurora B guides post-mitotic gene reactivation [ Cell Rep, 2024, 43(9):114739]	PubMed: 39276350
Visualization strategies to aid interpretation of high-dimensional genotoxicity data [ Environ Mol Mutagen, 2024, 10.1002/em.22604]	PubMed: 38757760
Histone H3 phospho-regulation by KimH3 in both interphase and mitosis [ iScience, 2023, 26(4):106372]	PubMed: 37013187
Rsk2 and Lrp5 deficiency limit osteosarcoma growth in cFos-transgenic mice by different mechanisms [ ProQuest , 2023, 30683696]	PubMed: None
Hesperadin suppresses pancreatic cancer through ATF4/GADD45A axis at nanomolar concentrations [ Oncogene, 2022, 10.1038/s41388-022-02328-4]	PubMed: 35551503

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