Idarubicin HCl

Idarubicin zeigt eine signifikante zytotoxische Aktivität gegen multizelluläre Sphäroide, vergleichbar mit den antiproliferativen Effekten auf Monolayer-Zellen. [1] Idarubicin hemmt CYP450 2D6.[2] Idarubicin ist etwa 57,5-fach und 25-fach aktiver als Doxorubicin bzw. Epirubicin. Idarubicin ist in der Lage, P-Glykoprotein-vermittelte Multidrug-Resistenz zu überwinden. [3] Idarubicin hemmt die PMN-Superoxidradikalbildung. [4] Idarubicin konnte mit monoklonalen Antikörpern (Anti-Ly-2.1, Anti-L3T4 oder Anti-Thy-1) gekoppelt werden, wobei die Proteinlöslichkeit und Antikörperaktivität erhalten blieben. [5] Idarubicin hemmt die Proliferation von NALM-6-Zellen mit einer IC50 von 12 nM. [6]

Die Reduktion von Idarubicin ist von Ketonreduktasen abhängig und verläuft stereoselektiver als die der meisten Ketone, wobei fast ausschließlich das (13S)-Epimer entsteht. Die hohe Stereospezifität bei der Idarubicin-Reduktion könnte auf chirale Induktion aufgrund des Vorhandenseins asymmetrischer Zentren nahe der Carbonylgruppe in Idarubicin zurückzuführen sein. [7]

• CYP450-Stoffwechsel-Experimente

  Die Bewertung des Idarubicin-Metabolismus durch die CYP450-Isoenzyme 3A4, 2D6, 2C8, 2C9 und 1A2 wird unter Verwendung isolierter humaner CYP450-Proteine für jedes Isoform durchgeführt. Für diese Bewertungen wird die High-Throughput-P450-Inhibitions-Testmethode eingesetzt. Die Stoffwechsel-Experimente sind darauf ausgelegt, die folgenden Eigenschaften jedes Medikaments zu untersuchen: (1) ob Idarubicin ein Substrat der CYP450 3A4, 2C8, 2C9, 1A2 oder 2D6 Isoenzyme ist; (2) ob der Metabolismus durch bekannte Inhibitoren jedes Isoenzyms beeinflusst wird; (3) ob Idarubicin Inhibitoren von CYP450-Isoenzymen ist; und (4) ob Caspofungin oder Itraconazol den CYP450-Metabolismus von Idarubicin hemmen. Dibenzylfluorescein (DBF) (CYP3A4, CYP2C8, CYP2C9), 3-Cyano-7-ethoxycoumarin (Cyp1A2) und 7-Methoxy-4-(aminomethyl)-coumarin (MAMC) (CYP2D6) sind die bekannten Substrate, die als Kontrollen verwendet werden, um die jeweilige Isoenzymaktivität zu bestätigen und die Auswirkungen von Idarubicin auf die Isoenzymaktivität zu bewerten. Darüber hinaus werden Ketoconazol, Quercetin, Suflaphenazol, Furafyllin und Chinidin als Kontroll-CYP450-Inhibitoren für die 3A4, 2C8, 2C9, 1A2 bzw. 2D6 Isoenzyme verwendet. Das Substrat, der Inhibitor plus Idarubicin wie angegeben werden zu jeder Proteinprobe hinzugefügt und für 20 bis 60 Minuten, wie vom Hersteller empfohlen, bei 37 °C inkubiert. Die Reaktionen werden mit einer organischen Lösung gestoppt, und die Proben werden dann entsprechend mittels Fluoreszenz-Plattenlesegerät analysiert. Für jedes Experiment werden Kontrollproben mit einer bekannten Menge Substrat und synthetisiertem Metaboliten, in Abwesenheit des Isoenzyms, für qualitative Vergleiche hergestellt. Alle Experimente werden in dreifacher Ausführung durchgeführt.

• Zelllinien

  NALM-6 cells

• Konzentrationen

  0.1 nM-10 μM

• Inkubationszeit

  24 hours

• Methode

  The anti-proliferative activity of the Idarubicin in the conjugate is compared to that of free drug by measuring the inhibition of [³H]thymidine uptake. Briefly, NALM-6 cells (1.5 × 10⁶/mL) are added to a flat-bottomed microtitre plate (100 μL/well) and incubated for 1 hours at 37ºC. Free Idarubicin and Idarubicin-mAb conjugates are sterilised by filtration and diluted in sterile PBS; various concentrations are added to the wells (100 μL/well) in duplicate and the plates are incubated at 37ºC, 7% CO₂ for 24 hours. Following incubation, 50 μL medium containing 1 μCi [³H]thymidine is added to each well and the plates are incubated for a further 4 hours. Cells are harvested onto glass-fibre filter-paper, dried and counted in a scintillation counter. Specificity studies are performed using the same technique where the ability of Idarubicin-anti-CD19 conjugates to kill CD19 + cells is compared to the cytotoxicity of irrelevant Idarubicin-JGT conjugates. NALM-6 cells (1.5× 10⁶/mL, 300 μL tube) are incubated for 30 rain on ice with various concentrations of Idarubicin-anti-CD 19 or Idarubicin-JGT conjugates. Following three washes in ice-cold RPMI-1640 medium (4 mL/wash), the cells are resuspended in fresh medium and transferred to 96-well plates (100 μL/well). Each tube is set up in duplicate and two wells are plated out per tube (a total of 4 wells per drug concentration). Cells are pulsed with [³H]thymidine 24 hours later and harvested.

• Tiermodelle

  Rat, rabbit, mouse, dog

• Dosierungen

  2 mg/kg, 0 mg/kg -75 mg/kg, 3 mg/kg and 0 mg/kg -75 mg/kg

• Verabreichung

  Administered via i.v.