KU-60019

Im Vergleich zu KU-55933 ist KU-60019 ein verbesserter Inhibitor der ATM-Kinase, weist jedoch eine ähnliche Zielselektivität auf. Diese Verbindung hat wenig Aktivität gegen DNA-PKcs und ATR mit IC50-Werten von 1,7 μM bzw. >10 μM, sowie gegen 229 andere Proteinkinasen wie PI3K, mTOR und mTOR/FKBP12. Es zeigt eine 3- bis 10-fach höhere Wirksamkeit als KU-55933 bei der Blockierung der strahleninduzierten Phosphorylierung von wichtigen ATM-Proteinzielen wie p53, γ-H2AX und CHK2 in menschlichen Gliomzellen U87 und U1242, da 1 μM dieses Inhibitors eine signifikante Abnahme der p53 (S15)-Phosphorylierung um >70% induziert, wofür ~10 μM KU-55933 erforderlich wären. Diese Chemikalie sensibilisiert menschliche Gliomzellen effektiv mit einem Dosis-Enhancement-Verhältnis von 1,7 und 4,4 bei 1 μM bzw. 10 μM und sensibilisiert auch die normalen Fibroblasten, aber nicht die A-T-Fibroblasten. Ihre Behandlung (3 μM) blockiert die basale und insulininduzierte AKT S473-Phosphorylierung um 70% bzw. ~50% und reduziert die strahleninduzierte AKT-Phosphorylierung vollständig unter das Kontrollniveau. Die Wirkung dieses Wirkstoffs auf die AKT S473-Phosphorylierung ist in Gliomzelllinien und normalen Fibroblasten, aber nicht in A-T (h-TERT)-Zellen, zu beobachten und kann durch den Phosphataseinhibitor Okadainsäure signifikant blockiert werden, was auf eine kritische Rolle der ATM-Kinase bei der Regulierung der AKT-Phosphorylierung über eine unbekannte Phosphatase hindeutet. Im Einklang mit der Hemmung des pro-survival AKT-Signalwegs hemmt es bei 3 μM signifikant die Migration und Invasion menschlicher Gliom-U87-Zellen um >70% bzw. ~60%, sowie U1242-Zellen um >50% bzw. ~60%. [1]

In orthotopen Gliom U1242/luc-GFP Xenograft-Modellen erhöht die Kombination von KU-60019 und Strahlung das Überleben von Mäusen signifikant stärker als die Verbindung allein, Strahlung allein oder keine Behandlung. Darüber hinaus sind p53-mutierte Gliome viel empfindlicher gegenüber dieser chemischen Radiosensibilisierung als Wildtyp-Gliome. [2]

• Zelllinien

  U87 and U1242

• Konzentrationen

  Dissolved in water, final concentrations ~3 μM

• Inkubationszeit

  1, 3, and 5 days

• Methode

  Cells are exposed to KU-60019 for 1, 3, and 5 days. Cell growth is determined by AlamarBlue. This compound is added to the medium to the recommended final concentration. Plates are incubated for 1 hour at 37 °C, fluorescence is determined on a Fluoro-Count plate reader (excitation 530 nm, emission 590 nm), and values are taken as a measure of cell growth. Cell survival is determined by trypan blue/fluorescence activated cell sorting (FACS) assay.

• Tiermodelle

  Athymic female mice harboring orthotopic glioma U1242/luc-GFP tumors or human glioma U1242/luc-GFP tumors

• Dosierungen

  KU-60019 (10 μM) is delivered at a rate of 0.5 μL/h by osmotic pump; KU-60019 (250 μM) in 12.5 μL is infused by CED.

• Verabreichung

  Administered intratumorally by convection-enhanced delivery or osmotic pump