KW-2449

Katalog-Nr.S2158 Charge:S215801

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Technische Daten

Formel

C20H20N4O
Molekulargewicht 332.4 CAS-Nr. 1000669-72-6
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 67 mg/mL (201.56 mM)
Ethanol 67 mg/mL (201.56 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung KW-2449 ist ein Multi-Target-Inhibitor, hauptsächlich für Flt3 mit einem IC50 von 6,6 nM, mäßig potent gegenüber FGFR1, Bcr-Abl und Aurora A; geringe Wirkung auf PDGFRβ, IGF-1R, EGFR. Phase 1.
Ziele
FLT3 (D835Y)
(Cell-free assay)		 Abl (T315I)
(Cell-free assay)		 FLT3
(Cell-free assay)		 Abl
(Cell-free assay)		 FGFR1
(Cell-free assay)		 Mehr anzeigen
1 nM 4 nM 6.6 nM 14 nM 36 nM
In vitro KW-2449, ein Multikinase-Inhibitor von FLT3, ABL, ABL-T315I und Aurora Kinase, wird zur Behandlung von Leukämiepatienten untersucht. Diese Verbindung zeigt potente wachstumshemmende Effekte auf Leukämiezellen mit FLT3-Mutationen durch Hemmung der FLT3-Kinase, was zu einer Herunterregulierung von phosphoryliertem-FLT3/STAT5, G1-Arrest und Apoptose führt. Die orale Verabreichung dieser Chemikalie zeigt eine dosisabhängige und signifikante Tumorwachstumshemmung in einem FLT3-mutierten Xenotransplantationsmodell mit minimaler Knochenmarksuppression. Bei FLT3-Wildtyp-Humanleukämie induziert es die Reduktion von phosphoryliertem Histon H3, G2/M-Arrest und Apoptose. Bei Imatinib-resistenter Leukämie trägt dieser Wirkstoff zur Aufhebung der Resistenz durch die gleichzeitige Herunterregulierung von BCR/ABL und Aurora Kinases bei. Die hemmende Aktivität dieser Verbindung wird durch die Anwesenheit von menschlichem Plasmaprotein, wie α1-saures Glykoprotein, nicht beeinflusst. Es besitzt eine potente wachstumshemmende Aktivität gegen verschiedene Arten von Leukämie durch mehrere Wirkmechanismen. Dieser Inhibitor hat eine signifikante Aktivität und rechtfertigt klinische Studien bei Leukämiepatienten mit FLT3-Mutationen sowie Imatinib-resistenten Mutationen. Die Phosphorylierungsgrade von FLT3 und STAT5 werden durch diese Chemikalie dosisabhängig gesenkt. Darüber hinaus hemmt es potent ABL-T315I, das mit IM-Resistenz assoziiert ist, mit einem IC50 von 4 nM. Andererseits hat diese Verbindung selbst bei einer Konzentration von 1 μM wenig Einfluss auf PDGFRβ, IGF-1R, EGFR und verschiedene Serin/Threonin-Kinasen. Es besitzt potente wachstumshemmende Aktivitäten nicht nur gegen FLT3/ITD-exprimierende Leukämiezellen, sondern auch gegen FLT3/KDM-aktivierte und Wildtyp-FLT3-überexprimierende Leukämiezellen. In Übereinstimmung mit dem wachstumshemmenden Effekt unterdrückt dieser Wirkstoff die Phosphorylierungen von FLT3 (P-FLT3) und seinem nachgeschalteten Molekül Phospho-STAT5 (P-STAT5) in MOLM-13-Zellen dosisabhängig. Darüber hinaus erhöht es den Prozentsatz der Zellen in der G1-Phase des Zellzyklus und reduziert reziprok den Prozentsatz der Zellen in der S-Phase, was zu einer Zunahme der apoptotischen Zellpopulation führt. Diese Verbindung kann konstitutiv aktive WT-FLT3-Kinase dephosphorylieren, aber die Proliferation von Leukämiezellen nicht hemmen, wenn sie nicht hauptsächlich von der FLT3-Kinase abhängig sind. Es wird schnell resorbiert und zu einem Hauptmetaboliten M1 umgewandelt. Präklinische Studien zeigen, dass diese Chemikalie durch Monoaminoxidase-B (MAO-B) und Aldehydoxidase in ihren Hauptmetaboliten M1 umgewandelt wird. Dieser Wirkstoff vermittelt Zytotoxizität durch Hemmung von FLT3/ITD. Er ist ein direkter Inhibitor von FLT3 und induziert die Hemmung seines nachgeschalteten Ziels STAT5. Diese Verbindung interagiert synergistisch mit HDACI, um Apoptose in Ph+ CML-Zellen zeit- und konzentrationsabhängig zu induzieren. Sie verstärkt synergistisch die Letalität von Vorinostat/SNDX275 in CML-Zellen. Diese Inhibitor-Regime sind aktiv gegen zusätzliche IM-resistente Bcr/Abl+-Leukämiezellen. Es reduziert moderat die Phosphorylierung von Histon H3, ein Indikator für die Aurora B-Aktivität, in Nocodozol-behandelten K562-Zellen.
In vivo Im MOLM-13-Tumorxenograftmodell zeigt die orale Verabreichung von KW-2449 über 14 Tage eine potente und signifikante Antitumorwirkung in dosisabhängiger Weise.
Merkmale Wurde als FLT3-Inhibitor in klinischen Studien untersucht, weitere befinden sich in der frühen Entwicklung.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[2]
  • FLT3-Phosphorylierung

    Leukämiezellen werden in phosphatgepufferter Salzlösung (PBS) gewaschen und anschließend durch Resuspendieren der Zellen in Lysepuffer (20 mM Tris pH 7,4, 100 mM NaCl, 1 % Igepal, 1 mM EDTA, 2 mM NaVO4, plus Komplett-Proteaseinhibitor KW-2449 für 30 Minuten unter Schütteln) lysiert. Der Extrakt wird durch Zentrifugation bei 1,6 × 104 g geklärt und der Überstand auf Protein untersucht (Bio-Rad). Ein 50-μg-Aliquot wird als Ganzzelllysat zur Analyse von STAT5 entnommen, der Rest wird für die Immunpräzipitation mit Anti-FLT3 verwendet. Anti-FLT3-Antikörper wird dem Extrakt für eine Inkubation über Nacht zugesetzt, dann wird Protein A-Sepharose für weitere 2 Stunden hinzugefügt. Getrennte Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Elektrophorese-Gele (SDS-PAGE) für Ganzzelllysat und Immunpräzipitate werden parallel durchgeführt. Nach dem Transfer auf Immobilon-Membranen wird ein Immunoblotting mit Antiphosphotyrosin-Antikörper (4G10) durchgeführt, um phosphoryliertes FLT3 nachzuweisen, oder für die Ganzzelllysatgele mit einem monoklonalen Rattenantikörper gegen phosphoryliertes STAT5 (Rest Y694), dann abgestreift und mit Anti-FLT3-Antikörper re-probiert, um die Gesamt-FLT3 zu messen. Proteine werden mittels Chemilumineszenz visualisiert, auf Kodak BioMax XAR Film exponiert, entwickelt und mit einem Bio-Rad GS800 Densitometer gescannt. Die Konzentration dieser Verbindung, bei der die Phosphorylierung von FLT3 oder STAT5 auf 50 % des Ausgangswertes (IC50) gehemmt wird, wird mittels linearer Regressionsanalyse der Dosis-Wirkungs-Kurven bestimmt. Zur direkten Analyse von FLT3 und STAT5 in zirkulierenden Blasten wird peripheres Blut in heparinisierten Röhrchen gesammelt und umgehend auf Eis gekühlt. Die Proben werden 10 Minuten bei 900 g und 4 °C zentrifugiert. Das Plasma wird entfernt und bei -80 °C eingefroren gelagert. Der Buffy Coat wird vorsichtig in eiskaltes PBS überführt, auf gekühltes Ficoll-Hypaque geschichtet und 5 Minuten bei 600 g und 4 °C zentrifugiert. Alle weiteren Schritte werden bei 4 °C durchgeführt. Mononukleäre Zellen werden gesammelt und schnell einmal in Erythrozyten-Lysepuffer (0,155 M NH4Cl, 0,01 M KHCO3, 0,1 mM EDTA) gewaschen, dann einmal in PBS gewaschen. Die Zellen werden dann wie für die FLT3- und STAT5-Analyse beschrieben lysiert.
Zell-Assay: [1]
  • Zelllinien

    MOLM-13 and RS4;11 cells

  • Konzentrationen

    33nM, 75nM, 0.1μM, 0.3μM and 0.15μM

  • Inkubationszeit

    24, 48, and 72 hours

  • Methode

    Cell viability is determined by the sodium 3′-[1-(phenylaminocarbonyl)-3, 4-tetrazolium]-bis (4-methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate assay after incubation with or without KW-2449 for 72 hours at 37 °C. The number of viable cells is determined using the Cell Proliferation Kit II. For cell-cycle analysis, MOLM-13 and RS4;11 cells are treated with this compound. After 24, 48, and 72 hours of incubation at 37 °C, DNA contents are analyzed. Cell cycle distribution of K562, TCC-Y, and TCC/Ysr is analyzed 24 hours after treatment with this chemical or imatinib.
Tierstudie:[3]
  • Tiermodelle

    CBySmn.CB17-Prkdsscid/J (BALB/C) mice are injected with BV173/E255K/Luc cl4 cells.

  • Dosierungen

    32 mg/kg/day, 5 days/week

  • Verabreichung

    Orally (p.o.) administered

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19541823/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19029442/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21474579/

Kundenproduktvalidierung

<p>Western blot analysis of p-histone and histone. 0-10μM KW2449 was added.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks KW-2449 Wurde zitiert von 12 Publikationen

Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
A community challenge for a pancancer drug mechanism of action inference from perturbational profile data [ Cell Rep Med, 2022, 3(1):100492] PubMed: 35106508
Phosphorylation of SHP2 at Tyr62 Enables Acquired Resistance to SHP2 Allosteric Inhibitors in FLT3-ITD-Driven AML [ Cancer Res, 2022, 82(11):2141-2155] PubMed: 35311954
KW-2449 and VPA exert therapeutic effects on human neurons and cerebral organoids derived from MECP2-null hESCs [ Stem Cell Res Ther, 2022, 13(1):534] PubMed: 36575558
Evaluation of CML TKI Induced Cardiovascular Toxicity and Development of Potential Rescue Strategies in a Zebrafish Model [ Front Pharmacol, 2021, 12:740529] PubMed: 34733159
Mechanisms of Oncogenesis in the Primary Liver Cell Cancer [ DTIC, 2021, 53] PubMed: None
The Global Phosphorylation Landscape of SARS-CoV-2 Infection [ Cell, 2020, 182(3):685-712.e19] PubMed: 32645325
Synergistic Anti Leukemia Effect of a Novel Hsp90 and a Pan Cyclin Dependent Kinase Inhibitors. [ Molecules, 2020, 8;25(9) pii: E2220] PubMed: 32397330
Small-Molecule and CRISPR Screening Converge to Reveal Receptor Tyrosine Kinase Dependencies in Pediatric Rhabdoid Tumors. [ Cell Rep, 2019, 28(9):2331-2344] PubMed: 31461650
Drug Target Commons: A Community Effort to Build a Consensus Knowledge Base for Drug-Target Interactions [Tang J Cell Chem Biol, 2018, 25(2):224-229] PubMed: 29276046

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