Ki8751

Katalog-Nr.S1363 Charge:S136302

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Technische Daten

Formel

C₂₄H₁₈F₃N₃O₄

Molekulargewicht

469.41

CAS-Nr.

228559-41-9

Löslichkeit (25°C)*

In vitro

DMSO

53 mg/mL (112.9 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	4%DMSO 1 Corn oil Validiert von Selleck Labs. Sollten Sie Anpassungen an dieser Formulierung benötigen, wenden Sie sich an unser Vertriebsteam für kundenspezifische Tests.	2.500mg/ml (5.33mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 40 μL of 62.5 mg/ml clear DMSO stock solution to 960 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung

Ki8751 ist ein potenter und selektiver Inhibitor von VEGFR2 mit einem IC50 von 0,9 nM, >40-fach selektiver für VEGFR2 als c-Kit, PDGFR und FGFR-2, mit geringer Aktivität gegenüber EGFR, HGFR und InsR.

Ziele

VEGFR2	c-Kit	PDGFRα
0.9 nM	40 nM	67 nM

In vitro

Ki8751 hemmt VEGFR2 potent und selektiv mit einem IC50 von 0,9 nM. Diese Verbindung hemmt auch PDGFR , c-Kit und FGFR-2 mit wesentlich höheren IC50-Werten (40 nM 170 nM). Außer diesen mehreren Kinasen stört sie andere Kinasen, einschließlich HGFR, EGFR und InsulinR, selbst bei 10 M, nicht. In humanen Nabelschnurvenen-Endothelzellen (HUVECs) reduziert diese Chemikalie (1 nM 100 nM) effektiv die VEGF-stimulierte Zellproliferation und Gefäßpermeabilität. In metastasierenden kolorektalen Krebszellen (CRC) MIP, RKO, SW620 und SW480, aber nicht in HCT116, erhöht sie (10 nM) die zelluläre Seneszenz.

In vivo

In Nacktmäusen mit humanen Tumortransplantaten von GL07-, St-4-, LC6-, DLD-1- und A375-Zellen hemmt Ki8751 (20 mg/kg) das Tumorwachstum. In Nacktratten-Xenograft-Modellen von LC-6-Zellen hemmt diese Verbindung (5 mg/kg) das Tumorwachstum vollständig, ohne das Körpergewicht zu beeinflussen.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:^{^[1]}	Zelluläre Kinase-Assays NIH3T3-Zellen, hergestellt durch Transfektion von humanem KDR. Die Zellen werden in einer mit Kollagen Typ I beschichteten 96-Well-Platte in einer Menge von 1,5 × 10⁴ pro Well kultiviert. Das Medium wird dann durch ein DMEM-Medium ersetzt, das 0,1 % FCS enthält. Ki8751, in DMSO verdünnt, wird jedem Well zugesetzt und kultiviert. rhVEGF wird zu einer Endkonzentration von 100 ng/mL hinzugefügt, und die Stimulation der Zellen wird bei 37 C durchgeführt. Die Zellen werden mit PBS (pH 7,4) gewaschen, 50 L eines Solubilisierungspuffers (20 mM HEPES (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,2 % Triton X-100, 10 % Glycerin, 5 mM Na₃VO₄, 5 mM Dinatriumethylendiamintetraacetat und 2 mM Na₄P₂O₇) wird dann hinzugefügt und ein Zellextrakt hergestellt. Separat wird PBS (50 L, pH 7,4), das 5 L/mL Antiphosphotyrosin-Antikörper (PY20) enthält, zu einer Mikroplatte für ELISA gegeben. Nach dem Waschen der Platte werden 300 L einer Blockierungslösung hinzugefügt. Der Zellextrakt wird auf die Platte übertragen. Ein Anti-VEGFR2-Antikörper und ein Peroxidase-markierter Anti-Kaninchen-Ig-Antikörper werden hinzugefügt. Als Nächstes wird ein chromogener Substrat für Peroxidase hinzugefügt, und die Absorption bei 450 nm wird mit einem Mikroplattenleser gemessen. Die VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität für jedes Well wird bestimmt, indem die Absorption mit VEGF-Zusatz und ohne Zusatz der Testprobe als 100 % VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität und VEGF als 0 % VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität angenommen wird. Die Konzentration der Hemmung (%) der VEGFR2-Phosphorylierung wird für jeden Fall bestimmt und der IC50-Wert berechnet.
Zell-Assay:^{^[1]}	Zelllinien HUVECs Konzentrationen 1 nM–100 nM Inkubationszeit 1 hour Methode To evaluate the inhibition of VEGF-Stimulated HUVEC proliferation by Ki8751, HUVECs are plated at a density of 4000 cells/200 μL/well in a type I collagen pre-coated 96-well plates. After 24 hours, the cells are incubated for 1 hour with this compound and then stimulated with 20 ng/mL rhVEGF. The cultures are incubated at 37 °C for 72 hours, then pulsed with 1 μCi/well [³H]thymidine and re-incubated for 14 hours. Cells are assayed for the incorporation of tritium using a beta counter.

Kinase-Assay:^{^[1]}

Zelluläre Kinase-Assays
NIH3T3-Zellen, hergestellt durch Transfektion von humanem KDR. Die Zellen werden in einer mit Kollagen Typ I beschichteten 96-Well-Platte in einer Menge von 1,5 × 10⁴ pro Well kultiviert. Das Medium wird dann durch ein DMEM-Medium ersetzt, das 0,1 % FCS enthält. Ki8751, in DMSO verdünnt, wird jedem Well zugesetzt und kultiviert. rhVEGF wird zu einer Endkonzentration von 100 ng/mL hinzugefügt, und die Stimulation der Zellen wird bei 37 C durchgeführt. Die Zellen werden mit PBS (pH 7,4) gewaschen, 50 L eines Solubilisierungspuffers (20 mM HEPES (pH 7,4), 150 mM NaCl, 0,2 % Triton X-100, 10 % Glycerin, 5 mM Na₃VO₄, 5 mM Dinatriumethylendiamintetraacetat und 2 mM Na₄P₂O₇) wird dann hinzugefügt und ein Zellextrakt hergestellt. Separat wird PBS (50 L, pH 7,4), das 5 L/mL Antiphosphotyrosin-Antikörper (PY20) enthält, zu einer Mikroplatte für ELISA gegeben. Nach dem Waschen der Platte werden 300 L einer Blockierungslösung hinzugefügt. Der Zellextrakt wird auf die Platte übertragen. Ein Anti-VEGFR2-Antikörper und ein Peroxidase-markierter Anti-Kaninchen-Ig-Antikörper werden hinzugefügt. Als Nächstes wird ein chromogener Substrat für Peroxidase hinzugefügt, und die Absorption bei 450 nm wird mit einem Mikroplattenleser gemessen. Die VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität für jedes Well wird bestimmt, indem die Absorption mit VEGF-Zusatz und ohne Zusatz der Testprobe als 100 % VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität und VEGF als 0 % VEGFR2-Phosphorylierungsaktivität angenommen wird. Die Konzentration der Hemmung (%) der VEGFR2-Phosphorylierung wird für jeden Fall bestimmt und der IC50-Wert berechnet.

Zell-Assay:^{^[1]}

Zelllinien
HUVECs
Konzentrationen
1 nM–100 nM
Inkubationszeit
1 hour
Methode
To evaluate the inhibition of VEGF-Stimulated HUVEC proliferation by Ki8751, HUVECs are plated at a density of 4000 cells/200 μL/well in a type I collagen pre-coated 96-well plates. After 24 hours, the cells are incubated for 1 hour with this compound and then stimulated with 20 ng/mL rhVEGF. The cultures are incubated at 37 °C for 72 hours, then pulsed with 1 μCi/well [³H]thymidine and re-incubated for 14 hours. Cells are assayed for the incorporation of tritium using a beta counter.

Referenzen

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15743179/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20367638/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21618508/

Kundenproduktvalidierung

: Daten von [ Mol Cell Proteomics , 2012 , 11, 745-57 ]

: Daten von [ , , Cancer Lett, 2017, 385:12-20 ]

: Daten von [ , , PLoS One, 2016, 11(9):e0161332 ]

Sellecks Ki8751 Wurde zitiert von 21 Publikationen

Combined forces of hydrostatic pressure and actin polymerization drive endothelial tip cell migration and sprouting angiogenesis [ Elife, 2025, 13RP98612]	PubMed: 39977018
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Crizotinib and Doxorubicin Cooperatively Reduces Drug Resistance by Mitigating MDR1 to Increase Hepatocellular Carcinoma Cells Death [ Front Oncol, 2021, 11:650052]	PubMed: 34094940
Network Pharmacology Reveals the Mechanism of Activity of Tongqiao Huoxue Decoction Extract Against Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury [ Front Pharmacol, 2020, 11:572624]	PubMed: 33519437
miR-221-3p Regulates VEGFR2 Expression in High-Risk Prostate Cancer and Represents an Escape Mechanism from Sunitinib In Vitro. [ J Clin Med, 2020, 9(3)]	PubMed: 32131507
Small-Molecule and CRISPR Screening Converge to Reveal Receptor Tyrosine Kinase Dependencies in Pediatric Rhabdoid Tumors. [ Cell Rep, 2019, 28(9):2331-2344]	PubMed: 31461650
Roxadustat promotes angiogenesis through HIF-1α/VEGF/VEGFR2 signaling and accelerates cutaneous wound healing in diabetic rats. [ Wound Repair Regen, 2019, 27(4):324-334]	PubMed: 30817065
Secretion-mediated STAT3 activation promotes self-renewal of glioma stem-like cells during hypoxia [ Oncogene, 2018, 37(8):1107-1118]	PubMed: 29155422

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