Ralimetinib (LY2228820) dimesylate

LY2228820 hemmt p38α sowie den PhosphoMAPKAPK-2 (pMK2)-Spiegel in RAW 264.7-Zellen mit IC50-Werten von 7 nM bzw. 34,3 nM. Darüber hinaus hemmt LY2228820 die Lipopolysaccharid (LPS)-induzierte TNFα-Bildung in murinen Peritonealmakrophagen mit einer IC50 von 5,2 nM. [1] In multiplen Myelom (MM)-Zellen, einschließlich INA6, RPMI-8226, U266 und RPMI-Dox40, blockiert LY2228820 (200 nM–800 nM) signifikant die p38MAPK-Signalübertragung, was durch seine Hemmung der Phosphorylierung von HSP27, einem nachgeschalteten Ziel von p38MAPK, ohne Beeinflussung des Expressionsniveaus von HSP27, deutlich wird. LY2228820 (200 nM–400 nM) verstärkt Zytotoxizität und Apoptose, aber LY2228820 allein hemmt das Wachstum von MM.1S-Zellen nicht. LY2228820 (200 nM–800 nM) hemmt auch die Sekretion von IL-6 und MIP-1α in langfristigen BM-Stroma-Zellen (LT-BMSCs), BM-Mononukleären Zellen (BMMNCs), peripheren Blut (PB) CD138⁺, CD138⁻ oder PB CD14⁺-Zellen. LY2228820 (400 nM–800 nM) blockiert auch die Osteoklastogenese aus CD14⁺-Zellen. [2]

In LPS-induzierten Mäusen hemmt LY2228820 effektiv die Bildung von TNFα mit einer Schwellen-Mindest-50%-Effektiven Dosis (TMED₅₀) von weniger als 1 mg/kg. In einem Rattenmodell der kollageninduzierten Arthritis (CIA) zeigt LY2228820 potente Effekte auf Pfotenschwellung, Knochenerosion und Knorpelzerstörung mit einer Schwellen-Mindest-50%-Effektiven Dosis (TMED₅₀) von 1,5 mg/kg. [1]

• Hemmung von p38α

  Die Hemmung von p38α wird unter Verwendung von rekombinantem humanem p38α in einem Standard-Filterbindungsprotokoll unter Verwendung von ATP[γ-³³P] und EGFR 21-mer-Peptid als Substrat bestimmt. Die funktionelle Hemmung von TNFα in murinen Peritonealmakrophagen wird unter Verwendung von LPS-Stimulation in Anwesenheit von LY2228820 bestimmt. Um die p38α-Aktivität in Zellen direkter zu beurteilen, werden RAW 264.7-Zellen mit LY2228820 behandelt und dann mit Anisomycin stimuliert. Der Grad der p38α-Aktivität wird unter Verwendung eines PhosphoMAPKAPK-2 (pMK2) (Thr 334)-Antikörpers nachgewiesen, der mit einem Rest reagiert, der spezifisch durch p38α phosphoryliert wird.

• Zelllinien

  MM cells, including INA6, RPMI-8226, U266, and RPMI-Dox40

• Konzentrationen

  200 nM–800 nM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  MTT assays and APO 2.7 staining are performed to assess cellular proliferation and induction of apoptosis, respectively. Viability is expressed as percent viable cells. Apoptosis in cells is evaluated by APO 2.7 staining. For detection of mitochondrial membrane protein 7A6 expressed in apoptotic cells, cells are incubated with APO 2.7 reagent for 20 min. Expression of APO 2.7 is determined using an EPICS XL flow cytometer.

• Tiermodelle

  Lipopolysaccharide (LPS)-induced Balb/c mice

• Dosierungen

  0–20 mg/kg

• Verabreichung

  Oral bid dosing for 14 days