Amuvatinib (MP-470)

Das Hydrochloridsalz von Amuvatinib (MP-470) hemmt mehrere Mutanten von c-Kit, einschließlich c-Kit^D816V, c-Kit^D816H, c-Kit^V560G und c-Kit^V654A, sowie eine Flt3-Mutante (Flt3^D835Y) und zwei PDGFRα-Mutanten (PDGFRα^V561D und PDGFRα^D842V), mit einer IC50 von 10 nM bis 8,4 μM. Es bindet auch an mehrere c-Kit-Mutanten, einschließlich c-Kit^K642E, c-Kit^D816V und c-Kit^K642E/D816V, und hemmt diese. [2] Diese Verbindung hemmt potent die Proliferation von OVCAR-3-, A549-, NCI-H647-, DMS-153- und DMS-114-Zellen mit einer IC50 von 0,9 μM bis 7,86 μM. [1] Es hemmt auch c-Kit und PDGFRα mit IC50-Werten von 31 μM bzw. 27 μM. Es zeigt eine potente Zytotoxizität gegen MiaPaCa-2-, PANC-1- und GIST882-Zellen mit einer IC50 von 1,6 μM bis 3,0 μM. [2] In MDA-MB-231-Zellen hemmt es (1 μM) die Tyrosinphosphorylierung von AXL. [3] In LNCaP- und PC-3-, aber nicht DU145-Zellen, zeigt es Zytotoxizität mit einer IC50 von 4 μM bzw. 8 μM und induziert Apoptose bei 10 μM. In LNCaP-Zellen induziert es (10 μM) einen G1-Arrest und verringert die Phosphorylierung von Akt und ERK1/2. [4] In SF767-Zellen hemmt es (10 μM) die c-Met-Phosphorylierung und sensibilisiert Zellen für Strahlung. In Kombination mit Strahlung hemmt es (10 μM) die Glykogensynthasekinase (GSK)3β-Aktivität, induziert Apoptose und stört die Reparatur von dsDNA-Brüchen, wahrscheinlich durch die Unterdrückung von Rad51. [5] [6]

In Maus-Xenograft-Modellen von HT-29-, A549- und SB-CL2-Zellen hemmt Amuvatinib (MP-470) (10 mg/kg–75 mg/kg i.p. oder 50 mg/kg–200 mg/kg p.o.) das Tumorwachstum. [1] In Mäusen mit LNCaP-Xenograft induziert diese Verbindung (20 mg/kg) in Kombination mit Erlotinib signifikant eine Hemmung des Tumorwachstums (TGI). [4]

• Kinase-Hemmtest von c-Kit und PDGFRα

  Zur Bestimmung der hemmenden Aktivität gegen c-Kit und PDGFRα werden Enzyme mit verschiedenen Konzentrationen von Amuvatinib (MP-470) und radiomarkiertem γ-³²P-ATP inkubiert. Nach 30 Minuten werden die Reaktionsgemische auf einem Acrylamidgel elektrophoretisch getrennt und die Autophosphorylierung, quantifiziert durch die Menge an radioaktiver Substanz, die in das Enzym eingebaut wurde, bestimmt.

• Zelllinien

  MiaPaCa-2, PANC-1, and GIST882 cells

• Konzentrationen

  0–30 μM, dissolved in DMSO

• Inkubationszeit

  96 hours

• Methode

  Cells are plated at a density of 2 × 10³ to 1 × 10⁴ cells per well in 100 μL medium on day 0 in 96-well Falcon microtitier plates. On day 1, ten μL of serial dilutions of Amuvatinib (MP-470) are added to the plates in quadruplicates. After incubation for 4 days, the cells are fixed with 10% Trichloroacetic acid solution. Subsequently, they are labeled with 0.04% Sulforhodamine B (SRB) in 1% acetic acid. After multiple washes to remove the excess dye, 100 μL of 50 mM Tris solution is added to each well in order to dissolve the dye. The absorbance of each well is read on a plate reader at 570 nm. Date are expressed as the percentage of survival of control calculated from the absorbance corrected for background absorbance. The surviving percent of cells is determined by dividing the mean absorbance values of the monoclonal antibody by mean absorbance values of the control and multiplying by 100.

• Tiermodelle

  Mice (athymic nude) xenograft models of HT-29, A549, and SB-CL2 cells

• Dosierungen

  10 mg/kg–75 mg/kg (i.p.) or 50 mg/kg–200 mg/kg (p.o.)

• Verabreichung

  Oral gavage (qd5 × 3 weeks) or intraperitoneal injection (qd5 × 2 weeks)