Motesanib Diphosphate (AMG-706)

Motesanib Diphosphate (AMG-706) besitzt eine breite Aktivität gegen die menschliche VEGFR-Familie und weist eine >1000-fache Selektivität gegenüber EGFR, Src und p38 Kinase auf. Es hemmt signifikant die VEGF-induzierte Zellproliferation von HUVECs mit einer IC50 von 10 nM, während es bei der bFGF-induzierten Proliferation mit einer IC50 von >3.000 nM nur geringe Auswirkungen zeigt. Diese Verbindung hemmt auch potent die PDGF-induzierte Proliferation und die SCF-induzierte c-kit-Phosphorylierung mit einer IC50 von 207 nM bzw. 37 nM, ist aber nicht wirksam gegen die EGF-induzierte EGFR-Phosphorylierung und die Zellviabilität von A431-Zellen. [1] Obwohl es allein eine geringe antiproliferative Aktivität auf das Zellwachstum von HUVECs zeigt, sensibilisiert es die Zellen signifikant gegenüber fraktionierter Strahlung. [2]

Die Verabreichung von Motesanib Diphosphate (AMG-706) in einer Dosis von 100 mg/kg hemmt die VEGF-induzierte vaskuläre Permeabilität signifikant und zeitabhängig. Die orale Verabreichung dieser Verbindung zweimal täglich oder einmal täglich hemmt die VEGF-induzierte Angiogenese im Rattenkorneamodell potent und dosisabhängig mit einer ED50 von 2,1 mg/kg bzw. 4,9 mg/kg. Es induziert eine dosisabhängige Tumorregression etablierter A431-Xenotransplantate durch selektive Hemmung der Neovaskularisierung in Tumorzellen. [1] In Kombination mit Bestrahlung zeigt es eine signifikante Antitumoraktivität in Xenotransplantatmodellen für Plattenepithelkarzinome des Kopf- und Halsbereichs (HNSCC). [2] Die Behandlung mit dieser Verbindung induziert auch signifikante dosisabhängige Reduktionen des Tumorwachstums und der Blutgefäßdichte von MCF-7-, MDA-MB-231- oder Cal-51-Xenotransplantaten. [3]

• In-vitro-Kinase-Assays

  Optimale Enzym-, ATP- und Substratkonzentrationen (Gastrin-Peptid) werden für jedes Enzym unter Verwendung homogener zeitaufgelöster Fluoreszenz (HTRF)-Assays ermittelt. Für Motesanib Diphosphate (AMG-706) wird eine 10-Punkt-Dosis-Wirkungs-Kurve für jedes Enzym unter Verwendung einer ATP-Konzentration von zwei Dritteln K_m für jedes getestet. Die meisten Assays bestehen aus Enzym, das mit Kinase-Reaktionspuffer [20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 5 mM MnCl₂, 100 mM NaCl, 1,5 mM EGTA] gemischt wird. Eine Endkonzentration von 1 mM DTT, 0,2 mM NaVO₄ und 20 μg/mL BSA wird vor jedem Assay hinzugefügt. Für alle Assays werden 5,75 mg/mL Streptavidin-Allophycocyanin und 0,1125 nM Eu-PT66 unmittelbar vor der HTRF-Reaktion hinzugefügt. Die Platten werden 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert und auf einem Discovery-Instrument abgelesen. IC50-Werte werden unter Verwendung des Levenberg-Marquardt-Algorithmus in eine Vier-Parameter-Logistikgleichung berechnet.

• Zelllinien

  A431, MO7e, HUVEC and NHDF cells

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Inkubationszeit

  2 hours

• Methode

  Cells are preincubated for 2 hours with different concentrations of Motesanib Diphosphate (AMG-706), and exposed with 50 ng/mL VEGF or 20 ng/mL bFGF for an additional 72 hours. After washing twice with DPBS, plates are frozen at -70 °C for 24 hours. Proliferation is assessed by the addition of CyQuant dye, and plates are read on a Victor 1420 workstation. IC50 data are calculated using the Levenberg-Marquardt algorithm into a four-parameter logistic equation.

• Tiermodelle

  Female Sprague-Dawley rats with induced corneal angiogenesis, and female CD-1 nu/nu mice injected s.c. with A431 cells

• Dosierungen

  ~100 mg/kg

• Verabreichung

  Orally administered twice daily or once daily