Mubritinib (TAK 165)

Mubritinib (TAK 165) zeigt eine > 4000-fache Selektivität gegenüber anderen Tyrosinkinasen wie EGFR, FGFR, PDGFR, Jak1, Src und Blk. Selbst bei einer geringen Konzentration von 0,1 μM blockiert es die HER2-Phosphorylierung signifikant, was zu einer Herunterregulierung des PI3K-Akt- und MAPK-Signalwegs in der Zelllinie BT474 mit hohem HER2-Spiegel führt. Diese Verbindung zeigt nicht nur eine hochpotente antiproliferative Wirkung in der ErbB2-überexprimierenden Krebszelllinie BT474 mit einer IC50 von 5 nM, sondern auch ausgeprägte antiproliferative Wirkungen in Zelllinien mit schwach exprimiertem HER2 mit IC50-Werten von 53 nM, 90 nM und 91 nM für LNCaP, LN-REC4 bzw. T24. Es zeigt keine hemmenden Aktivitäten gegen PC-3-Zellen mit sehr schwach exprimiertem HER2 mit einer IC50 von 4,62 μM sowie gegen EGFR-überexprimierende HT1376- und ACHN-Zelllinien mit einer IC50 von >25 μM. [1]

Mubritinib (TAK 165) hemmt signifikant das LN-REC4-Xenograft mit einem Verhältnis des Tumorvolumens von Behandlung/Kontrolle von 26,5 %. Obwohl in vitro unwirksam zur Hemmung des Wachstums von UMUC-3- und ACHN-Zellen (IC50-Werte von 1,812 bzw. >25 μM), hemmt die orale Verabreichung dieser Verbindung (10 oder 20 mg/kg pro Tag) das Wachstum von UMUC-3- und ACHN-Xenografts signifikant mit einem Verhältnis des Tumorvolumens von Behandlung/Kontrolle von 22,9 % bzw. 26 %, verglichen mit 20 mg/kg, was für das UMUC-3-Tumorwachstum unwirksam ist. [1]

• Inhibition der HER2/erbB2 Protein Tyrosine Kinase-Aktivität

  BT-474-Zellen werden auf 24-Well-Platten ausgesät und über Nacht kultiviert. Mubritinib (TAK 165) wird dann in verschiedenen Konzentrationen hinzugefügt. Nach 2 Stunden Inkubation werden die Zellen direkt in Natriumdodecylsulfat (SDS)-Probenpuffer (200 μL) geerntet. Aliquots, die gleiche Mengen an Gesamtzellextrakt enthalten, werden auf 7,5% bis 15% Gradienten-SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (PAGE) aufgetragen. Nach der Elektrophorese werden Proteine für die Western-Blot-Analyse unter Verwendung eines relevanten primären Antikörpers auf eine Polyvinylidenfluorid (PVDF)-Membran übertragen. Der Proteinnachweis erfolgt durch eine verstärkte chemilumineszente (ECL)-Nachweismethode. Das Ausmaß der Tyrosinphosphorylierung von HER2/erbB2 wird mit dem Lumino-Image-Analyser LAS-1000 plus gemessen. Die Konzentration dieser Verbindung, die die HER2/erbB2-Phosphorylierung um 50% (IC50) hemmt, wird aus einer Dosis-Wirkungs-Kurve berechnet, die mittels linearer Regression nach der Methode der kleinsten Quadrate mit der SAS-Software erstellt wurde.

• Zelllinien

  BT474, HT1376, UMUC-3, T24, ACHN, DU-145, PC-3, LN-REC4, and LNCaP cells

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 mM

• Inkubationszeit

  72 hours

• Methode

  Mubritinib (TAK 165) is added at various concentrations after cells are seeded into 6-well plates and cultured overnight, and the cells are treated continuously for 72 hours. After the incubation period, cells are counted for the measurement of antiproliferative activity.

• Tiermodelle

  Athymic nude mice (BALB/c nu/nμ) and SCID mice (C.B.-17 Scid/Scid) are implanted subcutaneously with UMUC-3, LN-REC4 or ACHN cells

• Dosierungen

  10 or 20 mg/kg/day

• Verabreichung

  Orally twice daily