Mycophenolate mofetil

Mycophenolate mofetil ist ein Ester-Prodrug des aktiven Immunsuppressivums Mycophenolsäure (MPA). Letztere zeigt eine nicht-kompetitive, selektive und reversible Hemmaktivität gegen inosine monophosphate dehydrogenase Typ I/II mit IC50 von 39 nM bzw. 27 nM. Darüber hinaus bewirkt MPA auch eine konzentrationsabhängige Hemmung der Proliferation von ConA-stimulierten T-Zellen, LPS-stimulierten B-Zellen und Alloantigen-spezifischen T-Zellen mit IC50 von 100 nM, 120 nM bzw. 51 nM. [1] Diese Verbindung in hoher Konzentration von 10 μg/mL induziert eine starke Apoptose in Mikrogliazellkulturen und erhöht die Anzahl aktivierter Caspase-3-immunreaktiver apoptotischer Zellen. Darüber hinaus hemmt sie (1 μg/mL) stark die Proliferation sowohl von Mikrogliazellen als auch von Astrozyten. [2] Eine aktuelle Studie zeigt, dass diese Chemikalie das Ausmaß des neuronalen Zelltods von organotypischen Hippocampus-Schnittkulturen nach neuronaler Verletzung zeitabhängig signifikant abschwächt. [4]

In einem heterotopen kardialen Transplantationsmodell von ACI-zu-Lewis-Ratten führt die Behandlung mit Mycophenolate mofetil in Dosen von 20 mg/kg und 40 mg/kg zu einer Verlängerung des Transplantatüberlebens mit einer mittleren Überlebenszeit (MST) von 14,5 Tagen bzw. 18,5 Tagen. [1] In einem Bleomycin (BLM)-induzierten Sklerodermie-Mausmodell reduziert diese Verbindung die Infiltration von Entzündungszellen, den Gewebe-Hydroxyprolingehalt und die Hautdicke. [3]

• IMP dehydrogenase Typen I und II enzymatische Aktivität

  IMP dehydrogenase Typen I und II werden aus E. coli, die menschliche Enzyme exprimieren, gereinigt. Der Assay wird in einer flachen, UV-transparenten 96-Well-Platte durchgeführt. Die endgültige 200 μL Reaktionsmischung enthielt 0,1 M Tris, 0,1 M KCl, 3 mM EDTA pH 8,0, 2 mM DTT und 40 nM entweder IMP dehydrogenase Typ I oder Typ II. Die Reaktion wird durch Zugabe von 400 μM NAD und 400 μM IMP initiiert, gefolgt von einer Inkubation bei 37 °C für 2,5 Stunden. Die Reaktionsrate der Umwandlung von NAD zu NADH wird dann basierend auf dem Anstieg der Absorption bei 340 nm gemessen. Die Assays werden auch in Gegenwart von 50 % menschlichem Serum durchgeführt, um die Serumproteinbindung durch verschiedene IMP dehydrogenase Inhibitoren abzuschätzen.

• Zelllinien

  ConA-stimulated T cells and LPS-stimulated B cells

• Konzentrationen

  0 to 10 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  The spleens of male Lewis rats aged 8 weeks are aseptically removed and teased into single-cell suspensions, and the resulting splenocytes are suspended in RPMI1640 medium containing 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin, and 100 μg/mL streptomycin. Assays are performed in flat-bottomed microtiter plates, with each well containing 150000 splenocytes in a total volume of 100 μL. Splenocytes are incubated in medium containing either 1 μg/mL Concanavalin A (ConA) or lipopolysaccharide (LPS) as T or B cell mitogen, respectively, along with various concentrations of this compound at 37 °C for 48 hours in a humidified atmosphere of 5% CO₂-95% air. During the final 6 hours of incubation, cells are pulsed with 1 μCi of ³H-thymidine/well, and harvested onto pressed fiberglass in a cell harvester. The uptake of ³H-thymidine by proliferating cells is measured using a liquid scintillation counter. The in vitro immune response of alloantigen-specific T cells is evaluated as a proliferation response using one-way mixed lymphocyte reaction assay. Mesenteric lymph nodes cells from male Lewis rats aged 8 weeks and splenocytes from male ACI rats aged 8 weeks are used as responder and stimulator cells, respectively. Single-cell suspensions are prepared, and the responder cells are cultured with irradiated (20 Gy) stimulator cells in RPMI1640 supplemented with 10% fetal calf serum, 100 U/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin, in 96-well plates (U-bottom) and in the presence of various concentrations of this compound (total volume: 200 μL, 37 °C, 5% CO₂ humidified atmosphere, 72 hours). As a negative control, responder cells are cultured with irradiated splenocytes of Lewis rats. The cell proliferation is quantified by the uptake of ³H-thymidine.

• Tiermodelle

  Lewis rats with abdominal vascularized heterotopic cardiac transplantation.

• Dosierungen

  ≤40 mg/kg

• Verabreichung

  oral administration