NVP-ADW742

NVP-ADW742 zeigt eine 6-fach höhere Selektivität für IGF-1R gegenüber InsR mit einer IC50 von 2,8 μM; minimale Hemmaktivität gegen c-Kit, HER1, PDGFR, VEGFR2 oder Bcr-Abl p210 mit einer IC50 von mehr als 5 μM. Diese Verbindung hemmt die serumstimulierte Zellproliferation in einer Vielzahl von Tumorzelllinien dosisabhängig, mit IC50-Werten von 0,1-0,5 μM für die multiplen Myelom (MM)-Zelllinien, und die Antitumorwirkungen auf MM-Zellen können durch die Kokultur mit BMSCs nicht überwunden werden. Es hebt auch die Reaktionsfähigkeit von Tumorzellen auf IL-6 in Anwesenheit von Serum auf. Darüber hinaus ist diese Chemikalie aktiv gegen MM-Zelllinien mit Resistenzen gegen konventionelle (zytotoxische Chemotherapie) oder experimentelle (CC-5013, TRAIL/Apo2L, PS-341) Antikrebsmittel sowie primäre Tumorzellen von MM-Patienten mit multiresistenter Erkrankung. Diese Verbindung verringert die Produktion von VEGF durch Tumorzellen und Knochenmarkstromazellen und unterdrückt die IGF-1-induzierte VEGF-Sekretion durch verschiedene Tumortypen wie Schilddrüsenkrebszellen oder MM-Zellen. Die IGF-1R-Hemmung durch diese Verbindung (0,75 μM) sensibilisiert MM-Zellen oder Prostatakrebszellen für andere Antikrebsmittel wie Doxorubicin, TRAIL/Apo2L oder PS-341. [1]

Die Verabreichung von NVP-ADW742 in einer Dosis von 10 mg/kg zweimal täglich hemmt das Tumorwachstum signifikant, verlängert das Überleben und verstärkt die Antitumorwirkung der zytotoxischen Chemotherapie im Mausmodell des diffusen multiplen Myeloms. [1]

• Assay zur zellulären Kinaseaktivität

  Der IC50-Wert für die Wirkung von NVP-ADW742 auf die Autophosphorylierung von IGF-1R wird auf zellulärer Ebene in Anwesenheit zunehmender Konzentrationen dieser Verbindung unter Verwendung von 96-Well-„Capture ELISAs“-Assays bestimmt. Kurz gesagt, NWT-21-Zellen werden in 96-Well-Gewebekulturplatten in komplettem Wachstumsmedium ausgesät und bis zu einer Konfluenz von 70–80 % gezüchtet und anschließend 24 Stunden lang in 0,5 % FCS-Medium ausgehungert. Anschließend werden die Zellen 90 Minuten lang in Anwesenheit dieses Inhibitors inkubiert, gefolgt von der Stimulation mit IGF-I (10 ng/mL) für 10 Minuten bei 37 °C. Anschließend werden die Zellen zweimal mit eiskaltem PBS gewaschen und bei 4 °C mit 50 μL/Well RIPA-Puffer (50 mM Tris-HCl, pH 7,2, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 6 mM EGTA, 1 % NP-40, 20 mM NaF, 1 mM Benzamidin, 15 mM Natriumpyrophosphat, 1 mM PMSF und 0,5 mM Na₃VO₄) lysiert. Die Lysate aus jedem Experiment werden dann auf schwarze ELISA-Platten übertragen, die mit Fängantikörpern spezifisch für IGF-1R vorbeschichtet sind. Nach der Einfangung durch die Antikörper werden die Lysate mit 40 μL eines alkalische Phosphatase (AP)-markierten Anti-Phosphotyrosin-Antikörpers (PY20(AP), verdünnt auf 0,2 μg/mL in RIPA-Puffer) gemischt und über Nacht bei 4 °C inkubiert. Nach dem Waschen (PBST) und der Inkubation für 45 Minuten bei RT mit dem lumineszierenden AP-Substrat CDPStar RTU mit Emerald II (90 μL/Well) wird die Lumineszenz mit einem Packard Top Count Scintillation Counter gemessen.

• Zelllinien

  MM-1S, MM-1R, RPMI-8226/S, OPM-1, OCI-My5, SKMM2, KMS-12-BM, XG-1, L363, S6B45 cells and et al.

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 10 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of NVP-ADW742 for 48 hours in the presence or absence of serum. Cell survival is examined using MTT assay.

• Tiermodelle

  Male SCID/NOD mice injected i.v. with MM-1S-Luc⁺ human MM cells

• Dosierungen

  10 mg/kg twice daily

• Verabreichung

  Injection i.p. or oral gavage