TAE684 (NVP-TAE684)

TAE684 (NVP-TAE684) zeigt keine signifikante Kreuzreaktivität gegenüber anderen Kinasen. Diese Verbindung hemmt die Proliferation von Ba/F3 NPM-ALK-Zellen potent mit einer IC50 von 3 nM, ohne die Überlebensfähigkeit von Ba/F3-Zellen selbst bei 1 µM zu beeinflussen. Es hemmt auch die Proliferation von NPM-ALK-exprimierenden humanen ALCL-Zelllinien, einschließlich Karpas-299 und SU-DHL-1, mit einer IC50 von 2–5 nM. Molekulare Modellierung zeigt, dass L258 einer der Hauptdeterminanten für die Kinase-Selektivität dieser Chemikalie sein könnte. Die Behandlung führt zu einer schnellen und anhaltenden Hemmung der Phosphorylierung von NPM-ALK. Die Verbindung induziert Apoptose und G1-Phasenarrest in NPM-ALK-exprimierenden Ba/F3-Zellen und ALCL-Patientenzelllinien. [1] Es überwindet deutlich Resistenzen in H3122 CR-Zellen, die das Fusionsonkogen EML4-ALK beherbergen, indem es das Zellwachstum reduziert, die ALK-Phosphorylierung unterdrückt und Apoptose induziert.[2] Die durch Expression der mALK R1279Q-Mutante induzierte Neuritenentwicklung konnte durch diese Verbindung bei 30 nM vollständig gehemmt werden. [3]

Nach 4-wöchiger Behandlung mit TAE684 (NVP-TAE684) in Dosen von 3 und 10 mg/kg kommt es zu einer signifikanten Verzögerung der Lymphomentwicklung und einer 100- bis 1.000-fachen Reduktion des Lumineszenzsignals, ohne Anzeichen von Verbindungs- oder krankheitsbedingter Toxizität im Karpas-299-Lymphommodell. Diese Verbindungstherapie induziert auch eine Krankheitsregression bei etablierten Karpas-299-Lymphomen und reguliert die CD30-Expression herunter. [1] Sie zeigt auch eine beeindruckende Antitumoraktivität gegen H3122 CR-Xenograft-Tumoren. [2] Darüber hinaus verbessert die Behandlung mit dieser Chemikalie den Rauaugen-Phänotyp beider ALK-Mutanten, insbesondere den bei ALKR1275Q beobachteten. [3]

• In-vitro-Enzymassays.

  Alle In-vitro-Enzymassays werden bei Upstate Biotechnology durchgeführt, mit Ausnahme von InsR und IGF-1R. Zur Bestimmung des IC50 von TAE684 (NVP-TAE684) gegen InsR und IGF-1R wird ein homogener zeitaufgelöster Fluoreszenzassay durchgeführt. ATP (10 mM) und 20 mg/ml biotinyliertes PolyEY (Glu, Tyr 4:1) werden mit 50 nL serieller Verdünnungen dieser Verbindung (10-500 nM) und 4 ng InsR-Enzym in Gegenwart des Kinase-Reaktionspuffers (20 mM Tris–Cl, pH 7,5/10 mM MgCl₂/3 mM MnCl₂/1 mM DTT/10 mM NaVO₄/0,1 mg/ml BSA) kombiniert. Die Assays werden 1 Stunde bei Raumtemperatur inkubiert. Die Reaktionen werden durch Zugabe von 10 μl der Detektionslösung beendet, die 50 mM EDTA, 500 mM KF, 0,5 mg/ml BSA, 5 mg/mL Eu3+-Kryptat-markierten Anti-Phosphotyrosin-Antikörper Mab PT66-K und 5 mg/mL Streptavidin-XLent enthält. Die Reaktion wird eine halbe Stunde inkubiert und die Fluoreszenzsignale werden auf Analyst GT abgelesen.

• Zelllinien

  Luciferase-expressing Karpas-299, SU-DHL-1, and Ba/F3 cells and transformed Ba/F3 stably expressing NPM-ALK, Bcr-Abl, or TEL-kinase fusion constructs.

• Konzentrationen

  1 nM-10 μM

• Inkubationszeit

  2–3 days

• Methode

  Cells are seeded in 384-well plates (2.5×10⁴ cells per well) and incubated with serial dilutions of TAE684 (NVP-TAE684) or DMSO for 2–3 days. Luciferase expression is used as a measure of cell proliferation/survival and is evaluated with the Bright-Glo Luciferase Assay System. IC50 values are generated by using XLFit software.

• Tiermodelle

  Karpas-299 xenografts are established in 4- to 6-week old female Fox Chase SCIDBeige mice.

• Dosierungen

  1, 3, and 10 mg/kg

• Verabreichung

  Once daily by oral gavage for 3 weeks