Nutlin-3

Nutlin-3 hemmt potent die MDM2-p53-Interaktion, was zur Aktivierung des p53-Signalwegs führt. Diese Verbindung induziert die Expression von MDM2 und p21 und zeigt eine potente antiproliferative Aktivität mit einer IC50 von ~1,5 μM, ausschließlich in Zellen mit Wildtyp-p53 wie HCT116, RKO und SJSA-1, aber nicht in den p53-Mutantenzelllinien SW480 und MDA-MB-435. In SJSA-1-Zellen induziert diese Verbindung bei 10 μM über 48 Stunden signifikant eine Caspase-abhängige Zell-Apoptosis um ~45 %. Obwohl sie auch das Wachstum und die Lebensfähigkeit der menschlichen Haut (1043SK) und des Mausembryos (NIH/3T3) mit IC50-Werten von 2,2 μM bzw. 1,3 μM hemmt, bleiben die Zellen 1 Woche nach der Behandlung selbst bei 10 μM dieser Chemikalie lebensfähig, im Gegensatz zu den SJSA-1-Zellen, bei denen die Lebensfähigkeit bei 3 μM dieser Chemikalie verloren geht. [1] Sie induziert keine Phosphorylierung von p53 an wichtigen Serinresten und zeigt keinen Unterschied in ihrer sequenzspezifischen DNA-Bindung und Fähigkeit, p53-Zielgene zu transaktivieren, im Vergleich zu phosphoryliertem p53, das durch die genotoxischen Medikamente Doxorubicin induziert wird, was zeigt, dass die Phosphorylierung von p53 an wichtigen Serinen für die transkriptionelle Aktivierung und Apoptosis entbehrlich ist. [2] Obwohl sie MDMX weniger effizient bindet als MDM2, kann diese Verbindung die MDMX–p53-Interaktion blockieren und den p53-Signalweg in Retinoblastomzellen (Weri1) mit einer IC50 von 0,7 μM induzieren. [3] Diese Chemikalie stört bei 30 μM auch die endogene p73-HDM2-Interaktion und verbessert die Stabilität und proapoptotische Aktivitäten von p73, was zu einer dosisabhängigen Zellwachstumshemmung und Apoptosis-Induktion in Zellen ohne Wildtyp-p53 führt. [4]

Die orale Verabreichung von Nutlin-3 bei 200 mg/kg zweimal täglich für 3 Wochen hemmt das Tumorwachstum von SJAS-1-Xenotransplantaten signifikant um 90 %, vergleichbar mit dem Effekt der Doxorubicin-Behandlung mit 81 % Hemmung des Tumorwachstums. [1]

• Biacore-Studie

  Kompetitionsassay wird auf einem Biacore S51 durchgeführt. Ein Series S Sensorchip CM5 wird für die Immobilisierung eines PentaHis-Antikörpers zur Erfassung des His-markierten p53 verwendet. Die Erfassungsrate beträgt ~200 Responseeinheiten (1 Responseeinheit entspricht 1 pg Protein pro mm²). Die Konzentration des MDM2-Proteins wird konstant bei 300 nM gehalten. Nutlin-3 wird in DMSO bei 10 mM gelöst und weiter verdünnt, um eine Konzentrationsreihe dieser Verbindung in jeder MDM2-Testprobe herzustellen. Der Assay wird bei 25 °C in Laufpuffer (10 mM Hepes, 0,15 M NaCl, 2 % DMSO) durchgeführt. Die MDM2-p53-Bindung in Anwesenheit dieser Chemikalie wird als Prozentsatz der Bindung in Abwesenheit davon berechnet und die IC50 wird berechnet.

• Zelllinien

  HCT116, RKO, SJSA-1, SW480, and MDA-MB-435

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 30 μM

• Inkubationszeit

  8, 24, and 48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of Nutlin-3 for 8, 24 and 48 hours. The transcriptional levels of p21 and MDM2 genes are analyzed by real-time PCR, and protein levels by western blotting. Cell viability is measured by the MTT assay. Cell apoptosis is determined by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling (TUNEL) staining with flow cytometry and fluorescence microscopy.

• Tiermodelle

  Athymic female nude mice (Nu/Nu-nuBR) injected subcutaneously with SJSA-1 cells

• Dosierungen

  200 mg/kg

• Verabreichung

  Orally, twice a day