OSU-03012 (AR-12)

OSU-03012 (AR-12) induziert den apoptotischen Zelltod in PC-3-Zellen mit einer IC50 von 5 µM und reduziert die Aktivität der immunpräzipitierten p70^S6K. Es unterdrückt das Zellwachstum in einer Vielzahl von Tumorzelllinien bei Konzentrationen von 3–5 μm vollständig, verglichen mit einer Konzentration von mindestens 50 μm. [1] Diese Verbindung fördert das Abtöten von Gliazellen in größerem Maße als in nicht transformierten Astrozyten. Sie verursacht eine dosisabhängige Induktion des Zelltods, der durch p53-Mutation, Expression von ERBB1 VIII oder den Verlust der Phosphatase- und Tensin-Funktion aufgrund einer homologen Deletion auf Chromosom 10 nicht verändert wird. OSU-03012 und ionisierende Strahlung verursachen eine additive, Caspase-unabhängige Erhöhung des Zelltods. Ihre Letalität als Einzelwirkstoff oder in Kombination mit Signalmodulatoren wird in Zellen, denen die Expression von BIM oder von BAX/BAK fehlt, nicht modifiziert. Sie fördert die Freisetzung von Cathepsin B aus dem lysosomalen Kompartiment und von AIF aus den Mitochondrien. Die Letalität dieser Verbindung ist in Protein-Kinase-R-ähnlichen Endoplasmatisches-Retikulum-Kinase-/-Zellen abgeschwächt, was mit der reduzierten Spaltung von BID und der Unterdrückung der Freisetzung von Cathepsin B und AIF in das Zytosol korrelierte. [2] Es hemmt die Proliferation und Migration von Schilddrüsenkrebszellen (NPA-, WRO- und ARO-Zellen) und induziert Apoptose, was zu einer Zunahme der Zellen in der S-Phase ohne Zunahme der Zellen in G2 führt. OSU-03012 ist ein ATP-kompetitiver Inhibitor der PAK-Aktivität und unterdrückt die Phosphorylierung von AKT in Schilddrüsenkrebszellen. [3] Es hemmt das Zellwachstum von hepatozellulären Karzinomzelllinien, einschließlich Huh7-, Hep3B- und HepG2-Zellen, mit IC50-Werten unter 1 μM. Diese Verbindung unterdrückt weder die PDK1- oder AKT-Aktivität noch induziert sie die zelluläre Apoptose, sondern induziert Autophagie in Huh7-Zellen. Darüber hinaus wird nach ihrer Behandlung eine Akkumulation reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) nachgewiesen. [4] Eine aktuelle Studie zeigt, dass sie die Anfälligkeit von (Bcr)-Abl-mutierten Zelllinien für Apoptose verstärken könnte. [5]

OSU-03012 (AR-12) unterdrückt das Tumorwachstum um 57,59% und erhöht gespaltenes LC3 in Huh7-Tumor-Xenografts bei 200 mg/kg. [4] Diese Verbindung verringert die Expression des EGFR-Proteins in den Tumoren um 48% im Vergleich zu Vehikelkontrollen und verhindert auch, dass YB-1 an den EGFR-Promotor in MDA-MB-435/LCC6-Xenografts bindet. [6] Es wird gut vertragen und hemmt das Wachstum von HMS-97-Schwannom-Xenografts um 55% nach oraler Verabreichung. [7]

• PDK-1 Kinase-Assay

  Dieser In-vitro-Assay wird unter Verwendung eines PDK-1-Kinase-Assay-Kits durchgeführt. Dieser zellfreie Assay basiert auf der Fähigkeit der rekombinanten PDK-1, in Gegenwart von DMSO-Vehikel oder OSU-03012 (AR-12), ihre nachgeschaltete Serum- und Glukokortikoid-regulierte Kinase zu aktivieren, die wiederum das Akt/Serum- und Glukokortikoid-regulierte Kinase-spezifische Peptidsubstrat RPRAATF mit [γ-³²P]ATP phosphoryliert. Das ³²P-phosphorylierte Peptidsubstrat wird dann mittels P81-Phosphocellulosepapier von dem restlichen [γ-³²P]-ATP getrennt und nach drei Waschvorgängen mit 0,75%iger Phosphorsäure in einem Szintillationszähler quantifiziert.

• Zelllinien

  PC-3 cells

• Konzentrationen

  0-10 μM

• Inkubationszeit

  ~72 hours

• Methode

  The effect of OSU-03012 (AR-12) on PC-3 cell viability is assessed by using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide assay in six replicates. Cells are grown in 10% FBS- supplemented RPMI 1640 in 96-well, flat-bottomed plates for 24 hours. They are exposed to various concentrations of this compound (0-10 μM) dissolved in DMSO (final concentration ≤0.1%) in 1% serum-containing RPMI 1640 for different time intervals (~72 hours). Controls receive DMSO vehicle at a concentration equal to that in OSU-03012-treated cells. The medium is removed and replaced by 200 μL of 0.5 mg/mL 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide in 10% FBS-containing RPMI 1640. The cells are incubated in the CO₂ incubator at 37 °C for 2 hours. Supernatants are removed from the wells, and the reduced 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide dye is solubilized in 200 μL DMSO per well. Absorbance at 570 nm is determined by using a plate reader.

• Tiermodelle

  Huh7 tumor xenografts in male BALB/c nude mice

• Dosierungen

  100-200 mg/kg

• Verabreichung

  Daily by gavage