PD 98059

PD98059 hemmt entweder das basale MEK1 oder ein teilweise aktiviertes MEK, das durch die Mutation von Serin an den Resten 218 und 222 zu Glutamat (MEK-2E) produziert wird, mit einer IC50 von 2 μM. Diese Verbindung hemmt die MAPK-Homologe JNK und P38 nicht. Es ist hochselektiv gegen MEK, da es eine Reihe anderer Kinaseaktivit en nicht hemmt, einschlie lich Raf-Kinase, cAMP-abh gige Kinase, Proteinkinase C, v-Src, Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF)-Rezeptorkinase, Insulinrezeptorkinase, PDGF-Rezeptorkinase und Phosphatidylinositol-3-Kinase. Dieser Inhibitor hemmt die PDGF-stimulierte Aktivierung von MAPK und den Thymidineinbau in 3T3-Zellen mit einer IC50 von ~10 μM bzw. ~7 μM. [1] Er verhindert wirksam die Aktivierung von MEK1 durch Raf oder MEK-Kinase mit einer IC50 von 4 μM und hemmt schwach die Aktivierung von MEK2 durch Raf mit einer IC50 von 50 μM. Diese Chemikalie hemmt nicht die Aktivierung der MEK-Homologe MKK4 und RK-Kinase, die an Stress- und Interleukin-1-stimulierten Kinasekaskaden in KB- und PC12-Zellen beteiligt sind, und die Aktivierung der p70 S6-Kinase durch Insulin oder Epidermal Growth Factor in Swiss 3T3-Zellen. [2] Es blockiert vollst dig die durch Nerve Growth Factor (NGF) induzierte Differenzierung von PC12-Zellen, ohne die Zellviabilit t zu ver dern. [3] Diese Verbindung hemmt die Proliferation von RAW264.7-Zellen in der RANKL-haltigen Kultur dosisabh gig, was zu einer offensichtlichen Abnahme der TRAP-positiven Zellen f hrt. [4]

Die Behandlung von M usen 30 Minuten vor einer fokalen zerebralen Isch mie mit PD98059 sch tzt vor Sch den, was zu einer Verringerung des Infarktvolumens f hrt. [5] Die Vorbehandlung mit dieser Verbindung 30 Minuten zuvor und anschlie end zusammen mit st dlichen Cerulein-Injektionen f r 3 Stunden verbessert die Cerulein-induzierte akute Pankreatitis signifikant auf der Grundlage des Pankreas-Feuchtgewichts und der Histologie. [6] Die Verabreichung dieser Chemikalie (10 mg/kg) an M use 1 Stunde nach Carrageenan f hrt zu einer Reduzierung aller gemessenen Entz dungsparameter. [7]

• In vitro MEK-hemmende Aktivität

  Der Einbau von ³²P in Myelin-Basismaterial (MBP) wird in Gegenwart von Glutathion-S-Transferase (GST)-Fusionsproteinen, die die 44-kDa-MAPK (GST-MAPK) oder die 45-kDa-MEK (GST-MEK1) enthalten, untersucht. Die Assays werden in 50 μL 50 mM Tris, pH 7,4/10 mM MgCl₂/2 mM EGTA/10 μM [γ-³²P]ATP, enthaltend 10 μg GST-MEK1, 0,5 μg GST-MAPK und 40 μg MBP, durchgef hrt. Nach Inkubation bei 30 C f r 15 Minuten werden die Reaktionen durch Zugabe von Laemmli SDS-Probenpuffer gestoppt. Phosphoryliertes MBP wird mittels SDS/10% PAGE aufgetrennt.

• Zelllinien

  K-Balb, KNRK, v-raf-3Y1, SRA/3Y1, EGFR/3T3, and K562

• Konzentrationen

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~100 μM

• Inkubationszeit

  3 dyas, or 7-10 days

• Methode

  For monolayer growth, cells are plated into multi-well plates at 10,000-20,000/mL. Forty-eight hours later, various concentrations of PD98059 are added to the cell growth medium and incubation is continued for an additional 3 days. Cells are then removed from the wells by incubation with trypsin and enumerated with a Coulter Counter. For growth in soft agar, cells are seeded into 35-mm dishes at 5,000-10,000 cells per dish with growth medium containing 0.3% agar and desired concentrations of this compound. After 7-10 days of growth, visible colonies are manually enumerated with the aid of a dissecting microscope.

• Tiermodelle

  Male Sprague–Dawley rats with acute pancreatitis

• Dosierungen

  10 mg/kg

• Verabreichung

  Injection i.v.