PHA-665752

Katalog-Nr.S1070 Charge:S107007

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Technische Daten

Formel

C32H34Cl2N4O4S
Molekulargewicht 641.61 CAS-Nr. 477575-56-7
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (155.85 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung PHA-665752 ist ein potenter, selektiver und ATP-kompetitiver c-Met Inhibitor mit einer IC50 von 9 nM in zellfreien Assays, mit einer >50-fachen Selektivität für c-Met gegenüber RTKs oder STKs.
Ziele
c-Met
(Cell-free assay)		 RON
(Cell-free assay)		 Flk1
(Cell-free assay)
9 nM 68 nM 200 nM
In vitro PHA-665752 hemmt die c-Met-Kinaseaktivität signifikant mit einem Ki von 4 nM und zeigt eine >50-fache Selektivität für c-Met im Vergleich zu verschiedenen Tyrosin- und Serin-Threonin-Kinasen. Diese Verbindung hemmt die HGF-stimulierte c-Met-Autophosphorylierung potent mit einer IC50 von 25-50 nM. Sie blockiert auch signifikant HGF- und c-Met-abhängige Funktionen wie Zellmotilität und Zellproliferation mit IC50-Werten von 40-50 nM bzw. 18-42 nM. Darüber hinaus hemmt diese Chemikalie die HGF-stimulierte oder konstitutive Phosphorylierung von Mediatoren downstream von c-Met wie Gab-1, ERK, Akt, STAT3, PLC-γ und FAK in mehreren Tumorzelllinien potent. Es hemmt das Zellwachstum in TPR-MET-transformierten BaF3-Zellen mit einer IC50 von <60 nM und hemmt die konstitutive Zellmotilität und -migration um 92,5 % bei 0,2 μM. Die Hemmung von c-Met durch diese Verbindung (0,2 μM) induziert auch eine Zellapoptose von 33,1 % und einen G1-Zellzyklusarrest, wobei die Zellen in der G1-Phase von 42,4 % auf 77,0 % ansteigen. Es kann mit Rapamycin zusammenwirken, um das Zellwachstum von TPR-MET-transformierten BaF3-Zellen und nicht-kleinzelligen Lungenkrebs-H441-Zellen zu hemmen.
In vivo Die Verabreichung von PHA-665752 induziert eine dosisabhängige Tumorwachstumshemmung von S114-Xenotransplantaten um 20 %, 39 % und 68 % bei Dosen von 7,5, 15 bzw. 30 mg/kg/Tag. Diese Verbindung reduzierte das Tumorwachstum von NCI-H69, NCI-H441 und A549 in Maus-Xenotransplantaten signifikant um 99 %, 75 % bzw. 59 %. Sie hemmt auch die Angiogenese signifikant um >85 %, da sie die Produktion des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors verringert und die Produktion des Angiogenese-Inhibitors Thrombospondin-1 erhöht.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • In-vitro-Enzymtest

    Das c-Met-Kinasedomänen-GST-Fusionsprotein wird für den c-Met-Assay verwendet. Der IC50-Wert von PHA-665752 für die Hemmung von c-Met basiert auf der Phosphorylierung von Kinase-Peptidsubstraten oder Poly-Glu-Tyr in Gegenwart von ATP und einem zweiwertigen Kation (MgCl2 oder MnCl2 10-20 mM). Der lineare Bereich (d.h. der Zeitraum, über den die Rate dem Anfangswert entspricht) wird für c-Met bestimmt, und die kinetische Messung und IC50-Bestimmung werden innerhalb dieses Bereichs durchgeführt.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    S114, GTL-16, NCI-H441, and BxPC-3

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

  • Inkubationszeit

    18, or 72 hours

  • Methode

    For proliferation assays, cells are grown in medium with 0.1% FBS for 48 hours after which they are treated with various concentrations of PHA-665752 in HGF (50 ng/mL) in a medium containing 2% FBS. After 18 hours, cells are incubated with BrdUrd for 1 hour, fixed, and stained with anti-BrdUrd peroxidase-conjugated antibody, and plates are read at 630 nm. For apoptosis assays, cells are grown in medium with 2% FBS in presence and absence of HGF (50 ng/mL) and various concentrations of this compound for 72 hours. After 72 hours, a mixture containing ethidium bromide and acridine orange is added, and apoptotic cells (bright orange cells or cell fragments) are counted by fluorescence microscopy.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Female athymic mice (nu/nu) bearing S114 or GTL-16 tumor xenografts

  • Dosierungen

    ~30 mg/kg/day

  • Verabreichung

    Injection via bolus i.v.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14612533/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15788682/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17440059/

Kundenproduktvalidierung

A, representative Western blot analyses of samples obtained from NSCLC cells exposed to 1 umol/L erlotinib or PHA-665,752 for 6 hours. Levels of total and phosphorylated forms of EGFR, MET, and HER3. B, representative Western blot analyses of samples obtained as described in A showing the levels of EGFR downstream signaling mediators. Protein samples obtained from untreated and treated cells were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with each antibody. Tubulin served to ensure equal loading.

Daten von [ Clin Cancer Res , 2014 , 20, 4806-15 ]

A, SCID mice bearing established HCC827/GR tumor cell xenografts were treated with each drug. The length and width of the tumors were measured at the days indicated and tumor volumes were calculated. The bars represent mean tumor volume ?SD. B, immunohistochemical staining for Ki-67 and TUNEL, as described in Materials and Methods. Quantitative data for proliferation and apoptotic indices are shown as Ki-67+ cells (left) and TUNEL+ cells (right). *, P < 0.01 and **, P < 0.001 for the combination of gefitinib plus NPS-1034 or gefitinib plus PHA-665752 versus either the control or drug alone.

Daten von [ Cancer Res , 2014 , 74, 253-62 ]

PHA-665752 increases the radiosensitivity and reverses the radioresistance induced by HGF in NPC cells. Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the c-H2AX foci. Representative immunofluorescence micrographs of the c-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x 400 magnification.

Daten von [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449(1), 49-54 ]

Radiosensitization induced by PHA-665752 is accompanied by the persistence of the γ-H2AX foci. (Top) Representative immunofluorescence micrographs of the γ-H2AX foci formation in PHA-665752 (1 uM), HGF (20 ng/ml), IR and their combination groups. The micrographs were taken at x400 magnification. (Bottom) The median number of the γ-H2AX foci per cell. The bars indicate the SD. ∗P < 0.01 compared with the IR alone group.

Daten von [ Biochem Biophys Res Commun , 2014 , 449, 49-54 ]

Sellecks PHA-665752 Wurde zitiert von 100 Publikationen

Inhibition of TFF3 synergizes with c-MET inhibitors to decrease the CSC-like phenotype and metastatic burden in ER+HER2+ mammary carcinoma [ Cell Death Dis, 2025, 16(1):76] PubMed: 39920140
Macrophage Subpopulation Promotes Skeletal Muscle Regeneration Through HGF/MET Signaling-Mediated Skeletal Muscle Stem Cell Proliferation [ Aging Cell, 2025, e70042.] PubMed: 40132988
Overcoming MET-targeted drug resistance in MET-amplified lung cancer by aurora kinase B inhibition [ Biochim Biophys Acta Mol Cell Res, 2025, 1872(7):120001] PubMed: 40499687
MET receptor serves as a promising target in melanoma brain metastases [ Acta Neuropathol, 2024, 147(1):44] PubMed: 38386085
LncRNA CHROMR/miR-27b-3p/MET axis promotes the proliferation, invasion, and contributes to rituximab resistance in diffuse large B-cell lymphoma [ J Biol Chem, 2024, 300(3):105762] PubMed: 38367665
Single targeting of MET in EGFR-mutated and MET-amplified non-small cell lung cancer [ Br J Cancer, 2023, 128(12):2186-2196] PubMed: 37059804
Cancer-Associated Fibroblasts Promote Radioresistance of Breast Cancer Cells via the HGF/c-Met Signaling Pathway [ Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2023, 116(3):640-654] PubMed: 36586496
MET Receptor Tyrosine Kinase Inhibition Reduces Interferon-Gamma (IFN-γ)-Stimulated PD-L1 Expression through the STAT3 Pathway in Melanoma Cells [ Cancers (Basel), 2023, 15(13)3408] PubMed: 37444518
Cabozantinib inhibits HBV-RNA transcription by decreasing STAT3 binding to the enhancer region of cccDNA [ Hepatol Commun, 2023, 10.1097/HC9.0000000000000313] PubMed: 37938099
Dual-targeting therapy against HER3/MET in human colorectal cancers [ Cancer Med, 2023, 10.1002/cam4.5673] PubMed: 36751113

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