PIK-75 HCl

Katalog-Nr.S1205 Charge:S120501

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Technische Daten

Formel

C16H14BrN5O4S.HCl
Molekulargewicht 488.74 CAS-Nr. 372196-77-5
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.51 mM)
Ethanol 9 mg/mL (18.41 mM)
Water Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung PIK-75 HCl ist ein p110α-Inhibitor mit einer IC50 von 5,8 nM (200-mal potenter als p110β), isoformspezifischen Mutanten an Ser773 und hemmt auch potent DNA-PK mit einer IC50 von 2 nM in zellfreien Assays.
Ziele
DNA-PK
(Cell-free assay)		 p110α
(Cell-free assay)		 p110γ
(Cell-free assay)		 p110δ
(Cell-free assay)
2 nM 5.8 nM 76 nM 0.51 μM
In vitro PIK-75 zeigt eine beeindruckende Potenz und Isoform-Selektivität bei p110α, während die entsprechenden IC50-Werte für andere PI3K-Isoformen, p110β, -γ und -δ, 1300 nM, 76 nM bzw. 510 nM betragen. Darüber hinaus ist PIK-75 bei Bindung an gereinigtes p110α ein nicht-kompetitiver Inhibitor bezüglich ATP mit Ki von 36 nM und kompetitiv bezüglich des Substrats PI mit Ki von 2,3 nM. PIK-75 zeigt auch eine potente Hemmung der DNA-PK. PIK-75 (1 μM) reduziert die Zellüberlebensfähigkeit durch signifikante Verringerung der mitochondrialen Aktivität in unstimulierten nicht-asthmatischen glatten Atemwegsmuskelzellen (ASM), asthmatischen ASM-Zellen und Lungenfibroblasten. Während in TGFβ-stimulierten ASM-Zellen PIK75 die mitochondriale Aktivität nur in asthmatischen Zellen verringert, ohne Effekte in nicht-asthmatischen Zellen. Eine aktuelle Studie zeigt, dass PIK-75 (10 nM) die TNF-α-induzierte CD38-mRNA-Expression hemmt und die TNF-α-induzierte ADP-Ribosyl-Cyclase-Aktivität in menschlichen glatten Atemwegsmuskelzellen signifikant abschwächt.
In vivo Im ErbB3WT-Tumormodell reduziert PIK-75 die In-vitro-chemotaktische Reaktion auf HRGβ1 und senkt die pAkt-Spiegel um 40 %. Außerdem reduziert PIK-75 signifikant die Tumorzellmotilität und die In-vivo-Invasion in primären ErbB3WT-Tumoren. Bei CD1-Männermäusen führt PIK-75 zu schwerwiegenden Beeinträchtigungen im Insulintoleranztest (ITT) und Glukosetoleranztest (GTT) sowie zu einem Anstieg der Glukoseproduktion während eines Pyruvat-Toleranztests (PTT).
Merkmale PI3K- und DNA-PK-Inhibitor.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • Inhibitionsassays

    Der PI3K-Inhibitor PIK-75 wird in Dimethylsulfoxid zu 10 mM gelöst und bis zur Verwendung bei –20 °C gelagert. Die PI3K-Enzymaktivität wird in 50 μL 20 mM HEPES, pH 7,5, und 5 mM MgCl2, das 180 μM Phosphatidylinositol enthält, bestimmt, wobei die Reaktion durch Zugabe von 100 μM ATP (enthaltend 2,5 μCi [γ-32P]ATP) gestartet wird. Nach einer 30-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 50 μL 1 M HCl gestoppt. Phospholipide werden anschließend mit 100 μL Chloroform/Methanol [1:1 (v/v)] und 250 μL 2 M KCl extrahiert, gefolgt von einer Flüssigszintillationszählung. Inhibitoren werden in 20 % (v/v) Dimethylsulfoxid verdünnt, um eine Konzentrations- versus Enzymaktivitäts-Hemmkurve zu erstellen, die dann mit Prism Version 5.00 für Windows analysiert wird, um die IC50 zu berechnen. Für kinetische Analysen wird ein lumineszierender Assay zur Messung des ATP-Verbrauchs verwendet. Die PI3K-Enzymaktivität wird in 50 μL 20 mM HEPES, pH 7,5, und 5 mM MgCl2 mit PI und ATP in verschiedenen Konzentrationen bestimmt. Nach einer 60-minütigen Inkubation bei Raumtemperatur wird die Reaktion durch Zugabe von 50 μL Kinase-Glo gestoppt, gefolgt von einer weiteren 15-minütigen Inkubation. Die Lumineszenz wird dann mit einem Fluostar-Plattenlesegerät abgelesen. Die Ergebnisse werden mit Prism analysiert.
Zell-Assay:[3]
  • Zelllinien

    A2780, A2780/cp70, 2780AD, HCT116, HT29, WIL, CALU-3, MCF7, PC3 and HS852 cells

  • Konzentrationen

    0-10 μM

  • Inkubationszeit

    48 hours

  • Methode

    Mitochondrial activity is assessed after stimulation with TGFβ with or without inhibitors for 48 hours using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT) assay. Harvested washed cells are resuspended in DMEM-lO% FCS and aliquoted (500 μL) into 24-well cluster plates prior to serial dilution (1:2) in duplicates. To each well, 100 μL of an appropriate MTT concentration (dissolved in PBS and filtered through a 0.2 μm filter before use to remove any blue formazan product) is added immediately after diluting the cells, which are then incubated for 3.5 hours at 37 °C. The resulting blue formazan product is solubilized overnight (16 hours) at 37 °C by the addition of 500 μL of 10% sodium dodecyl sulfate　(SDS) in 0.01 M HCl to each well. A sample (150　μL)　from each duplicate well is transferred to a 96-well　microplate, and the optical density determinedby automated spectrophotometry against a reagent blank (no　cells).　Absorbance is measured at a test wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 690 nm. For each primary cell culture, results from three to six wells from each treatment are averaged, and data are expressed as absorbance 570 to 690 nm.
Tierstudie:[5]
  • Tiermodelle

    MTLn3 cells are injected into the right fourth mammary fat pad from the head of female severe-combined immunodeficient/NCr mice.

  • Dosierungen

    ≤1 μM

  • Verabreichung

    Administered via i.p.

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21778304/
  • #
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21349933/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22556157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21725367/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22142257/

Kundenproduktvalidierung

A549 cells were treated with DMSO or PIK-75 (200 nM) for 1 h and subsequently stimulated with izTRAIL for 24 h. Long-term survival was visualized after 7 days by crystal violet staining. One of two independent experiments is shown.

Daten von [ Cell Death Differ , 2014 , 21(3), 491-502 ]

A549 cells were treated with PIK-75 (100 nM) or SNS-032 (300 nM) for the indicated times. Cells were lysed and subjected to western blotting. One representative of two independent experiments is shown.

Daten von [ Cell Death Differ , 2014 , 21(3), 491-502 ]

DW compounds dose-dependently and persistently blocked the PI3K/mTOR signaling pathway in RH30 cells. DW09849 persistently inhibited PI3K signaling. RH30 cells treated with 0.1 uM DW09849 or PIK-75 were harvested at indicated times (0, 0.25, 0.75, 1.5, 3, 6, 12, and 24 hours). Western blot analyses were conducted to detect the indicated proteins. Data shown are representative of three independent experiments. Con, concentration.

Daten von [ J Pharmacol Exp Ther , 2014 , 348(3), 432-41 ]

<p>Knockdown of BRCA1 sensitizes cells to PI3K/AKT pathway inhibitors. MCF7 cells transfected with either BRCA1-siRNA or control-siRNA were treated with increasing amounts of inhibitors targeting the PI3K/AKT pathway for 48 h in triplicate. Viable cells were measured by MTT assay.</p>

Daten von [ Mol Carcinog , 2012 , 52, 667-75 ]

Sellecks PIK-75 HCl Wurde zitiert von 46 Publikationen

Lysosomal PIP3 revealed by genetically encoded lipid biosensors [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2025, 122(13):e2426929122] PubMed: 40127277
The mevalonate pathway contributes to breast primary tumorigenesis and lung metastasis [ Mol Oncol, 2024, 10.1002/1878-0261.13716] PubMed: 39119789
PIK Your Poison: The Effects of Combining PI3K and CDK Inhibitors against Metastatic Cutaneous Squamous Cell Carcinoma In Vitro [ Cancers (Basel), 2024, 16(2)370] PubMed: 38254859
Pharmacological Targeting of Androgen Receptor Elicits Context-Specific Effects in Estrogen Receptor-Positive Breast Cancer [ Cancer Res, 2023, 83(3):456-470] PubMed: 36469363
MDM2 antagonists promote CRISPR/Cas9-mediated precise genome editing in sheep primary cells [ Mol Ther Nucleic Acids, 2023, 31:309-323] PubMed: 36726409
Reciprocal regulation of Daxx and PIK3CA promotes colorectal cancer cell growth [ Cell Mol Life Sci, 2022, 79(7):367] PubMed: 35718818
The Lectin LecB Induces Patches with Basolateral Characteristics at the Apical Membrane to Promote Pseudomonas aeruginosa Host Cell Invasion [ mBio, 2022, 13(3):e0081922] PubMed: 35491830
PIK-75 overcomes venetoclax resistance via blocking PI3K-AKT signaling and MCL-1 expression in mantle cell lymphoma [ Am J Cancer Res, 2022, 12(3):1102-1115] PubMed: 35411248
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
Isthmin-1 is an adipokine that promotes glucose uptake and improves glucose tolerance and hepatic steatosis [ Cell Metab, 2021, S1550-4131(21)00326-0] PubMed: 34348115

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