PLX-4720

Katalog-Nr.S1152 Charge:S115207

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Technische Daten

Formel

C17H14ClF2N3O3S
Molekulargewicht 413.83 CAS-Nr. 918505-84-7
Löslichkeit (25°C)* In vitro DMSO 83 mg/mL (200.56 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Lösungsmittel einzeln und der Reihe nach zum Produkt hinzufügen.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml bedeutet schwer löslich oder unlöslich.
* Bitte beachten Sie, dass Selleck die Löslichkeit aller Verbindungen intern testet und die tatsächliche Löslichkeit geringfügig von veröffentlichten Werten abweichen kann. Dies ist normal und ist auf geringfügige Batch-zu-Batch-Variationen zurückzuführen.
* Versand bei Raumtemperatur (Stabilitätstests zeigen, dass dieses Produkt ohne Kühlmaßnahmen versendet werden kann.)

Vorbereitung von Stammlösungen

Biologische Aktivität

Beschreibung PLX4720 ist ein potenter und selektiver Inhibitor von B-RafV600E mit einer IC50 von 13 nM in einem zellfreien Assay, ebenso potent wie c-Raf-1 (Y340D- und Y341D-Mutationen), 10-fache Selektivität für B-RafV600E gegenüber Wildtyp-B-Raf.
Ziele
C-Raf-1 (Y340D/Y341D)
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 BRK
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
6.7 nM 13 nM 130 nM 160 nM
In vitro PLX-4720 zeigt eine über 10-mal höhere Selektivität gegenüber Wildtyp-B-Raf und eine über 100-mal höhere Selektivität gegenüber anderen Kinasen wie Frk, Src, Fak, FGFR und Aurora A mit einer IC50 von 1,3–3,4 μM. Diese Verbindung hemmt signifikant die ERK-Phosphorylierung in Zelllinien mit B-RafV600E mit einer IC50 von 14–46 nM, jedoch nicht in Zellen mit Wildtyp-B-Raf. Sie hemmt signifikant das Wachstum von Tumorzelllinien, die das B-RafV600E-Onkogen tragen, wie COLO205, A375, WM2664 und COLO829 mit einer GI50 von 0,31 μM, 0,50 μM, 1,5 μM bzw. 1,7 μM. Darüber hinaus induziert diese chemische Behandlung bei 1 μM einen Zellzyklusarrest und Apoptose ausschließlich in den B-RafV600E-positiven 1205Lu-Zellen, nicht aber in den B-Raf-Wildtyp-C8161-Zellen. Diese Verbindung (10 μM) induziert signifikant eine >14-fache Expression von BIM in den PTEN+-Zellen im Vergleich zu den PTEN--Zelllinien (4-fach), was eine Erklärung für die Resistenz von PTEN--Zellen gegenüber dieser chemisch induzierten Apoptose liefert.
In vivo Die orale Verabreichung von PLX-4720 in einer Dosis von 20 mg/kg/Tag führt zu signifikanten Tumorwachstumsverzögerungen und -regressionen in B-RafV600E-abhängigen COLO205-Tumorxenograften, ohne offensichtliche Nebenwirkungen bei Mäusen, selbst bei einer Dosis von 1 g/kg. Diese Verbindung in einer Dosis von 100 mg/kg zweimal täglich eliminiert fast vollständig die 1205Lu-Xenografts mit B-RafV600E, während sie keine Aktivität gegen C8161-Xenografts mit Wildtyp-B-Raf aufweist. Die Antitumorwirkungen dieser Verbindung korrelieren mit der Blockade des MAPK-Signalwegs in jenen Zellen, die die V600E-Mutation aufweisen. Diese chemische Behandlung in einer Dosis von 30 mg/kg/Tag hemmt signifikant das Tumorwachstum von 8505c-Xenografts um >90 % und verringert dramatisch die Fernmetastasen in der Lunge.

Protokoll (aus Referenz)

Kinase-Assay:[1]
  • In-vitro-Raf-Kinaseaktivitäten

    Die In-vitro-Kinaseaktivitäten von Wildtyp-Raf und Mutanten werden durch Messung der Phosphorylierung von biotinyliertem MEK-Protein unter Verwendung der AlphaScreen-Technologie von Perkin-Elmer bestimmt. Für jedes Enzym (0,1 ng) werden 20-μL-Reaktionen in 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01 % Tween-20, 100 nM Biotin-MEK-Protein, verschiedenen ATP-Konzentrationen und steigenden Konzentrationen von PLX-4720 bei Raumtemperatur durchgeführt. Die Reaktionen werden nach 2, 5, 8, 10, 20 und 30 Minuten mit 5 μL einer Lösung gestoppt, die 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA und 0,3 % BSA enthält. Die Stopplösung enthält außerdem Phospho-MEK-Antikörper, Streptavidin-beschichtete Donor-Beads und Protein-A-Akzeptor-Beads aus dem AlphaScreen Protein A Detection Kit. Der Antikörper und die Beads werden in der Stopplösung im Dunkeln bei Raumtemperatur 30 Minuten lang vorinkubiert. Die Endverdünnung des Antikörpers beträgt 1/2.000, und die Endkonzentration jeder Bead beträgt 10 μg/mL. Die Assay-Platten werden eine Stunde lang bei Raumtemperatur inkubiert und dann mit einem PerkinElmer AlphaQuest-Reader abgelesen.
Zell-Assay:[1]
  • Zelllinien

    COLO205, A375, WM2664, COLO829, HT716, SW620, H460, Calu-6, HCT116, SK-MEL2, SK-MEL3, Lovo, H1299, 1205Lu, and C8161 cells

  • Konzentrationen

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 mM

  • Inkubationszeit

    24, 48, and 72 hours

  • Methode

    Cells are treated with various concentrations PLX-4720 for 24, 48, and 72 hours. Cell proliferation is measured by using the CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay or MTT assay. For cell cycle analysis, supernatant and cells are collected, pelleted, and fixed with 70% ethanol. Before staining with propidium iodide (10 μg/mL), cells are incubated for 1 hour at 37 °C in 0.5 mg/mL RNase I to rid samples of residual RNA contamination. Samples are then analyzed by using the EPICS XL apparatus. For the assessment of apoptosis, media and cells are harvested and pelleted before staining with annexin-FITC and propidium iodide. Samples are subsequently analyzed by using the EPICS XL apparatus.
Tierstudie:[1]
  • Tiermodelle

    Female athymic mice (NCr nu/nu) implanted s.c. with COLO205 cells, and SCID mice with 1205Lu or C8161 cells

  • Dosierungen

    5, 20, or 100 mg/kg

  • Verabreichung

    Oral gavage once or twice daily

Referenzen

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18287029/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317224/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20498063/

Kundenproduktvalidierung

Combinatorial knockdown of NF1 and C-RAF abrogates NF1-mediated resistance to B-RAF inhibition at the level of ERK phosphorylation. A375 cells were infected with NF1 shRNA and treated with either DMSO or PLX4720 for 16 h. Cell lysates were analyzed for the indicated proteins.

Daten von [ Cancer Discov , 2013 , 3, 350-62 ]

(D)Melanoma cell lines were treated with 0.5 uM Pi-103 and/or 2 uM PLX4720 for 4 h. Samples were analyzed by Western blotting for the indicated proteins. β-Actin served as a loading control. (E) Melanoma cell lines were treated with a dilution series of Pi-103 either alone or in combination with the BRAFV600E inhibitor PLX4720 at a concentration of 3 uM (D10) or 1 uM (453A0) for 3 d. Total cell numbers were determined with a cell titer blue assay. The Y-axis represents the percentage of living cells.

Daten von [ Genes Dev , 2012 , 26, 1055-69 ]

<p>RAF inhibitors induce dimer formation between KSR and RAF, and activate KSR by CRAF. (A) GDC0879 but not PLX4720 induces BRAF/CRAF dimers. Cells overexpressing myc-CRAF and BRAF were treated with drug for 1 h and CRAF immunoprecipitates were immunoblotted for BRAF and CRAF (epitope tagged with myc). (B) GDC0879 but not PLX4720 enhances KSR/BRAF complexes. KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and BRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted using antibodies to BRAF. (C) Both GDC0879 and PLX4720 induce KSR/CRAF complexes.KSR immunoprecipitates were prepared from cells overexpressing FLAG-KSR and myc-CRAF after treatment with the indicated drug for 1 h and immunoblotted for CRAF using myc antibodies. (D and E) Requirement of KSR for drug-induced ERK activation. Lysates fromwild-type and KSR deficient fibroblasts, transfected with RASV12, were treated with the indicated doses of either GDC-0879 (D) or PLX4720 (E) for 1 h. Lysates were immunoblotted for phospho-ERK1 and 2, ERK2, and RASV12. (F) KSR and CRAF cooperate to activate MEK. Cells expressing the indicated constructs were treated with a 50 μM PLX4720 for 2 h before cell lysates were prepared and analyzed for pMEK by immunoblotting. CRAF(TM) refers to the T421M gatekeeper mutant that cannot bind to the drug(4). (G) KSR in vitro kinase reactions. Cells were cotransfected with WT or ATP binding deficient KSR and CRAF and immunoprecipitates prepared after cells were treated with an activating dose of PLX (10 μM) for 1 h. KSR immunoprecipitates were prepared, pretreated with 50 uM PLX4720 to inhibit coprecipitating RAF activity, and then tested for kinase activity using purified MEK. MEK phosphorylation was detected using a pMEK specific antibody.</p>

Daten von [ Proc Natl Acad Sci USA , 2011 , 108, 6067-6072 ]

<p>PTEN predicts for PLX4720-induced apoptosis. A, basal PTEN and phospho-AKT(pAKT; S473, T308) expression in PTENt (WM164, 451Lu, SK-mel-28, WM983A, WM35, WM51) and PTEN (WM239A, WM266-4, WM793, M233, WM9, 1205Lu) melanoma cell lines. B, MTT assay of PTENt (gray)-expressing versus PTEN (black) cell lines. C, PTENt cells are more sensitive than PTEN cells to PLX4720-mediated apoptosis. Cells treated for 48 hours with 3 or 10 μmol/L PLX4720 before being stained for TMRM and Annexin-V. Apoptosis was measured by flow cytometry. Data shows mean SE mean of 3 independent experiments.*, PTENt cohort significantly different from PTEN cohort(P < 0.05).</p>

Daten von [ Cancer Res , 2011 , 71, 2750-2760 ]

Sellecks PLX-4720 Wurde zitiert von 206 Publikationen

Elevated NR2F1 underlies the persistence of invasive disease after treatment of BRAF-mutant melanoma [ J Clin Invest, 2025, 135(18)e178446] PubMed: 40955663
Elevated Transglutaminase-2 in SOX10-Deficient Melanoma Promotes Tumor Onset and Decreases Intratumoral CD4+ T Cells [ Cancer Res, 2025, 10.1158/0008-5472.CAN-24-3267] PubMed: 40742313
PTRF Confers Melanoma-Acquired Drug Resistance Through the Upregulation of EGFR [ Cell Prolif, 2025, e70086.] PubMed: 40745979
A functional comparison of two transplantable syngeneic mouse models of melanoma: B16F0 and YUMM1.7 [ Biol Open, 2025, 14(9)bio062175] PubMed: 40878826
Noncanonical role of Golgi-associated macrophage TAZ in chronic inflammation and tumorigenesis [ Sci Adv, 2025, 11(4):eadq2395] PubMed: 39841821
The ribotoxic stress response drives UV-mediated cell death [ Cell, 2024, 187(14):3652-3670.e40] PubMed: 38843833
Tracking the EMT-like phenotype switching during targeted therapy in melanoma by analyzing extracellular vesicle phenotypes [ Biosens Bioelectron, 2024, 10.1016/j.bios.2023.115819] PubMed: 37952322
Mcl-1 mediates intrinsic resistance to RAF inhibitors in mutant BRAF papillary thyroid carcinoma [ Cell Death Discov, 2024, 10(1):175] PubMed: 38622136
The ERK5 pathway in BRAFV600E melanoma cells plays a role in development of acquired resistance to dabrafenib but not vemurafenib [ FEBS Lett, 2024, 10.1002/1873-3468.14960] PubMed: 38977937
Executioner caspases restrict mitochondrial RNA-driven Type I IFN induction during chemotherapy-induced apoptosis [ Nat Commun, 2023, 14(1):1399] PubMed: 36918588

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