Palomid 529 (P529)

Palomid 529 (P529) hemmt die Proliferation und erhöht die Apoptose von Endothelzellen, wobei sowohl die VEGF-getriebene als auch die bFGF-getriebene Endothelzellproliferation mit einer IC50 von 20 nM bzw. 30 nM gehemmt wird. Es behält die Fähigkeit bei, die Apoptose von Endothelzellen zu induzieren und die VEGF-A-getriebene Phosphorylierung von pAktS473, pGSK3βS9 und pS6 zu verringern. Dieses Compound verhindert jedoch weder die phosphorylierte Mitogen-aktivierte Proteinkinase (pMAPK) noch pAktT308 so potent wie pAktS473.[1] Es reduziert nicht nur die proliferative Reaktion in der ischämischen Netzhaut, sondern verbessert auch die Organisation und Struktur der sich bildenden Gefäße. [1] P529 zeigt eine potente antiproliferative Aktivität im NCI-60-Zelllinien-Panel, mit einer wachstumshemmenden 50 (GI50) <35 μM. Darüber hinaus verstärkt es signifikant die antiproliferative Wirkung der Strahlung in Prostatakrebszellen (PC-3), was zu einer konzentrationsabhängigen Wachstumshemmung der PC-3-Zellen führt. Dosen von 2 und 7 μM führten zu einer Wachstumshemmung von 30 bzw. 60 %. Es hemmt die strahleninduzierte p-Akt-Aktivierung und verringert das Bcl-2/Bax-Verhältnis in PC-3. Dieses Compound hemmt nicht nur die strahleninduzierte Überexpression von Id-1 und VEGF, sondern reguliert auch die strahleninduzierte MMP-2 und MMP-9 herunter. [2]

Palomid 529 (P529) zeigt nach seiner Behandlung eine dosisabhängige Hemmung der Ad-VEGF-A-getriebenen Angiogenese. Es hemmt das Wachstum von C6V10-Gliom-Tumoren in Nacktmäusen nach i.p.-Gabe und verringert die AktS473-, aber nicht die AktT308-Signalübertragung. Diese Verbindung hemmt auch das Tumorwachstum, die Angiogenese und die vaskuläre Permeabilität. [1] Die Behandlung von PC-3-Tumor tragenden Mäusen damit reduzierte das Tumorwachstum im Vergleich zu Kontrollen um 57,1 %. [2] Es ist ein wirksamer Suppressor der Müller-Zellproliferation, der Glianarbenbildung und des Photorezeptorzelltods in einem Kaninchenmodell der Netzhautablösung (RD). [3] Palomid 529 unterdrückt signifikant das Wachstum Brca1-defizienter Tumoren in Mäusen durch Hemmung sowohl der Akt- als auch der mTOR-Signalübertragung. [4]

• Östrogenrezeptor-Bindungsassays

  Die Proteine werden mit Kaninchen-Retikulozytenlysaten hergestellt. Die Menge der in jeder Reaktion verwendeten Matrize wird empirisch bestimmt und die Expression wird in parallelen Reaktionen überwacht, bei denen [³⁵S]Methionin in den Rezeptor eingebaut wird, gefolgt von Gelelektrophorese und Exposition gegenüber Film. Bindungsreaktionen der Östrogenrezeptoren (ER) und Palomid 529 (P529) werden in einem Endvolumen von 100 µl in TEG-Puffer [10 mM Tris (pH 7.5), 1.5 mM EDTA, 10% Glycerin] durchgeführt. In jeder Bindungsreaktion wird in Gegenwart von 0.5 nM [³H]Estradiol (E2) 5 µl in vitro transkribierter und translatierter Rezeptor verwendet. Dieses Compound wird routinemäßig von 10⁻¹¹ bis 10⁻⁶ M getestet und in Ethanol verdünnt. Die Reaktionen werden über Nacht bei 4 °C inkubiert und gebundenes E2 wird durch Zugabe von 200 µl Dextran-beschichteter Kohle quantifiziert. Nach 15-minütiger Rotation bei 4 °C werden die Röhrchen 10 Minuten lang zentrifugiert und 150 µl des Überstandes werden zu 5 ml Szintillationsmischung gegeben, um die cpm durch Flüssigszintillationszählung zu bestimmen. Die maximale Bindung wird durch Konkurrenz des gebundenen E2 mit nur dem Ethanol-Vehikel bestimmt. Kontrollen für den Hintergrund sind in jedem Experiment mit 5 µl unprogrammiertem Kaninchen-Retikulozytenlysat enthalten. Dieser Wert, typischerweise 10% bis 15% der maximalen Zählwerte, wird von allen Werten subtrahiert. Die Daten werden grafisch dargestellt und K_i-Werte berechnet. Die Experimente werden mindestens dreimal in Duplikaten durchgeführt.

• Zelllinien

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC)

• Konzentrationen

  ~20 μM

• Inkubationszeit

  48 hours

• Methode

  Human umbilical vascular endothelial cells (HUVEC) are used. The proliferation assay is carried out by seeding the HUVECs in 96-well plates at a density of 1,000 per well in complete medium. Following a 24-hour plating period, the cells are starved for 24 hours in 0.5% serum before being treated with Palomid 529 (P529) in the presence of 10 ng/mL basic fibroblast growth factor (bFGF) or VEGF in complete medium. After 48 hours, cell number is determined using a colorimetric method. The results are expressed as the percentage of the maximal bFGF or VEGF response in the absence of this compound. Nonproliferating endothelial cells are assayed by growing HUVECs to quiescence in 96-well plates and treating with it for 48 hours. Initially, 5,000 cells per well are seeded and confluence is achieved the next day. The plates are incubated for another 24 hours to ensure growth arrest before treatment with the same compound.